分子生物学实验课件:11蛋白质的SDS-PAGE电泳.pptVIP

分子生物学实验课件:11蛋白质的SDS-PAGE电泳.ppt

  1. 1、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。。
  2. 2、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  3. 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
  4. 4、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
  5. 5、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们
  6. 6、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
  7. 7、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
SDS电泳 【实验材料】 SDSSDS 分离胶(下) 浓缩胶(上) 灌制分离胶 按照上表配制分离胶溶液 取4.5ml分离胶溶液立即灌入两玻璃板的间隙,梳子前沿1cm处 缓慢覆盖400μl水(200μl/边) 37℃放置20-30分钟 凝固好后,倾出水.用滤纸条吸去多余的水分 * * 实验十 诱导表达蛋白的SDS电泳检测 【实验目的】 学习和掌握SDS电泳原理 掌握SDS电泳检测诱导表达蛋白的方法 【实验原理】 带电颗粒在电场中泳动的速度与电场强度和带电颗粒的净电荷量成正比,而与颗粒半径(分子量和结构)和介质粘度成反比 若样品为混合的蛋白质溶液时,由于不同蛋白质的等电点和分子量是不同的,因此经电泳后,就形成了泳动度不同的区带 结构因素——蛋白质的变性消除 (1)强阴离子去污剂:十二烷基磺酸钠(SDS) (2)还原剂:二硫苏糖醇(DTT) (3)物理作用:加热 电荷因素——SDS结合消除 (1)变性的多肽与SDS结合因而带负电荷 (2)多肽与SDS结合的量与多肽的分子量成正比 (3) SDS多肽复合物的迁移率只与分子量相关 分子筛作用 分子量大的蛋白质泳动的速度慢,分子量小的蛋白质泳动的速度快 10-43 12-60 20-80 36-94 57-212 15 12 10 7.5 5.0 线性分离范围/kDa 丙烯酰胺浓度/% SDS的有效分离范围 浓缩胶 分离胶 诱导表达产物(自己上次实验制备) SDS系统(北京六一) 电泳仪 中分子量蛋白质Marker 【实验步骤】 凝胶板的制备 点样及电泳 蛋白质的染色和脱色 密封条 梳子 平,凹玻板 斜楔板 电泳槽 凝胶板的制备 1 2 3 4 配胶 成分 水 3.3 ml 4.1 ml 30%(聚)丙烯酰胺溶液 4.0 ml 1.0 ml 0.5mol/L Tris(pH6.8) 750 μl 1.5mol/L Tris(pH8.8) 2.5 ml 10%SDS 100 μl 60 μl TEMED 10 μl 8 μl 10%过硫酸铵 100 μl 60 μl 总体积 10 ml 6 ml 2人配一组溶液,2人配一块胶 灌制浓缩胶 按照上表配制浓缩胶溶液 取浓缩胶约2.5ml立即灌入两玻璃板的间隙 立即插入梳子(注意,梳子有正反). 避免产生气泡.室温放置约30分钟.凝固好后,拔出梳子。

文档评论(0)

学习让人进步 + 关注
实名认证
文档贡献者

活到老,学到老!知识无价!

1亿VIP精品文档

相关文档