实验六血糖及血清胆固醇测定.pptVIP

返回 当前31页，共36页，星期日。 生物化学与分子生物学实验 一、酶法（GOD-POD）测血清葡萄糖含量 当前1页，共36页，星期日。 实验目的 掌握葡萄糖氧化酶法测定血糖含量的原理和方法 掌握测定血糖的临床意义 当前2页，共36页，星期日。 邻甲苯胺法 酶法： 血糖的测定方法： 准确度、灵敏度高，稳定性好 葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联法 （GOD-POD） 实验原理 当前3页，共36页，星期日。 偶联酶法测血糖 葡萄糖 ﹢ O2 H2O2 葡萄糖酸 ﹢ 葡萄糖氧化酶 （GOD） H2O2 ﹢ 4-氨基 安替比林 H2O 醌亚胺染料 ﹢ 过氧化物酶 （POD） 红色 当前4页，共36页，星期日。 红色醌亚胺染料在500nm处具有吸收峰 采用标准对比法可计算得到样品中葡萄糖 浓度 红色醌亚胺染料的生成量与葡萄糖含量 成正比 当前5页，共36页，星期日。 实验器材 试管1.5×5cm（×3）、试管架 吸量管2mL（×1）、洗耳球 微量加样器：20μl的Pipetman 恒温水浴箱 离心机、离心管10ml（×2） 当前6页，共36页，星期日。 实验试剂 葡萄糖测定试剂盒：原装试剂在2～8℃避光保存，有效期15个月。混合后2～8℃可稳定1个月，室温可稳定3天 葡萄糖标准液：100mg/Dl(5.55mmol/L) 实验样品：新鲜无溶血血清 当前7页，共36页，星期日。 实验操作 1. 酶工作液配置（直接用试剂盒） 2. 标本处理 抽取全血 3-5 mL 37℃保温15分钟 3000转/min离心10min 取上清液备用 当前8页，共36页，星期日。 3. 取3支干净干燥的小试管按表加入试剂 4. 各管加好后混匀，置37℃水浴 30min，0.5cm光径比色杯，以空白试剂调零，在500nm波长下比色 先加体积少的，再加多的 管号 试剂 空白管 标准管 待测管 蒸馏水(μL ） 10 —— —— 标准葡萄糖(μL ） —— 10 —— 待测血清(μL ） —— —— 10 酶工作液(mL ） 1.5 1.5 1.5 当前9页，共36页，星期日。 标准液吸取后应立即上盖，以防水分挥发 工作液混浊或有絮状物视为失效 本法特异性高，维生素C，谷胱甘肽，左 旋多巴引起负偏差 10μl液体必须全部溶于1.5ml酶工作液中 注意 10μL液体不易精确加入，实验时要仔细检查移液枪的密封性。此外，移液枪外壁不要沾有液体。 当前10页，共36页，星期日。 二、酶法（COD-PAP）测血清总胆固醇(TC) 当前11页，共36页，星期日。 实验目的 掌握酶法测定血清总胆固醇含量的原理 熟悉酶法测定血清总胆固醇含量的操作方法 了解总胆固醇测定的临床意义 当前12页，共36页，星期日。 胆固醇酯酶 +FFA 胆甾烯酮+ H2O2 胆固醇氧化酶 COD 实验原理 +4-氨基安替比林 +酚 醌亚胺 过氧化物酶 H2O2 PAP 胆固醇酯 游离胆固醇 当前13页，共36页，星期日。 红色的醌型化合物在510nm处有吸收峰，颜色深浅与总胆固醇的浓度成正比。 采用标准对比法可计算其含量。 总胆固醇含量正常参考值范围为3.1-5.7mmol/L 当前14页，共36页，星期日。 实验器材 小试管（×3）、试管架 刻度吸量管2mL（×1）、洗耳球 微量加样器(20μl) 恒温水浴箱 离心机、离心管10ml（×2） 当前15页，共36页，星期日。 实验试剂 R1液：磷酸盐缓冲液、对氯酚 R2液：4-氨基安替比林、酶 胆固醇标准液：5.2mmol/L 当前16页，共36页，星期日。 实验步骤 1. 工作试剂配制： R1 10ml+R2 1ml混合，可保存1周 2. 标本处理: 抽取全血3~5ml 37℃保温15分钟 3000转/min离心10min 取上清液备用 最适样品为当日空腹采集无溶血无乳糜的血清。 当前17页，共36页，星期日。 3. 取3支小试管编号，按表加入试剂 管号 试剂 空白管 标准管 待测管 蒸馏水（μl） 10 — — 标准液（μl） — 10 — 样品（μl） — — 10 工作试剂（ml） 0.6 0.6 0.6 充分混合，37℃水浴15分钟 蒸馏水（ml） 1.0 1.0 1.0 0.5cm光径比色杯，以空白试剂调零，在510nm波长下比色 当前18页，共36页，星期日。 注意事项 最后加酶工作试剂，各管反应时间应一致 工作试剂防止葡萄糖和甘油三酯污染 若需检测游离胆固醇含量，将酶试剂去掉