高效液相色谱的类型课件.pptVIP

根据固定相和分离机理不同， 高效液相色谱可分为多种类型： ? 液 - 液吸附色谱 ? 液 - 固分配色谱 ? 化学键合相色谱 ? 离子交换色谱 ? 离子色谱 ? 尺寸排阻色谱 …... 一、液 — 固吸附色谱 ( 一 ) 原理 ? 基于各组分在固体吸附剂表面上具有不同 的吸附能力而进行分离。 当流动相携带试样组分通过吸附剂时，各组分 分子和流动相分子与吸附剂表面活性中心发生竞争 吸附，与吸附剂性质类似的组分易被吸附，与吸附 剂表面活性中心的几何结构相适应的组分也易被吸 附 , 结果不同组分由于结构的不同，受到的吸附力也 不同，则保留值也不同，最终被分离。 ( 二 ) 固定相 ? 液 — 固吸附色谱常用的固定相是： 固体吸附剂 主要有： 极性： 硅胶、氧化铝、分子筛 非极性： 活性炭 ， ? ? ? ( 三 ) 用途 ? 主要用于分离极性不同或含极性 基团相同但数目不同的试样，也适合 分离异构体，但不宜分离同系物。 ? 液 — 固吸附色谱的分离效果不太 好，目前使用较少。 二、液 — 液分配色谱 ( 一 ) 原理 根据各待测组分在互不相溶的两相中分 配系数不同而进行分离的。 在色谱柱中，随着流动相的移动，被 分离各组分在固定相和流动相之间的分配 平衡需进行多次，造成各组分的迁移速率 不同，从而实现分离的过程。 ( 二 ) 固定相 ? 原则上，用于 GC 的固定相也可 用于 HPLC 作固定相，常用硅胶做载 体。但 HPLC 固定液易流失，因此常 用的只有几种，按极性由高到低为： ? , ? - 氧二 丙 腈 (ODPN) 、 聚乙 二 醇 (PEM) 、三甲撑二醇 (TMG) 、 十八 烷 (C18) 、角鲨烷 (SQ) 等。 ( 三 ) 流动相 ? HPLC 分析中，为防止固定相的 流失，流动相与固定液应尽量不互溶， 或者说二者的极性相差越大越好。因 此，根据流动相与固定相极性的差别 程度，可将液液色谱分为： 1. 正相分配色谱 ? 定义： 固定相为极性，流动相为非极性 的液 — 液分配色谱称正相分配色谱。 ? 用途：主要用于极性组分的分离。 ? 流出顺序： 被分离组分按极性从小到大 的顺序流出，即极性小的先流出，极性 大的后流出。 2. 反相分配色谱 ? 定义： 固定相为非极性，流动相为极性 的液 — 液分配色谱称反相分配色谱。 用途：主要用于非极性组分的分离。 流出顺序： 被分离组分按极性从大到小 的顺序流出，即极性大的先流出，极性 小的后流出。 ? ? 三、化学键合相色谱 ( 一 ) 化学键合固定相 是通过化学反应以共价键形 式将有机固定液键合在硅胶载体 表面，而得到的各种性能的固定 相。 ( 二 ) 优点 ? (1) 固定液不流失。 ? ? ? ? (2) (3) (4) (5) 热稳定性和化学稳定性好， 能在 pH=2 ? 8.5 的介质中使用。 消除了机械涂渍固定液表面不均匀 带来的弊病。 可键合各种不同类型的固定液， 制备适应于各种色谱的固定相。 适合于梯度淋洗。 ( 三 ) 化学键合方法 通常，化学键合相的载体主要是硅胶 ( 表面有硅醇基 ) ： 方法一 ( 硅酯化 ) ： Si OH + R OH SOCl 2 Si O R 方法二 ( 氯化 ) ： Si OH SOCl 2 Si Cl RLi, RMgCl Si R 方法三 ( 硅烷化 ) ： Si OH + R 3 SiCl Si O SiR 3 + HCl 特点： ? (1) Si-O-R ： 对热不稳定、遇水、乙醇等极性 溶剂会发生水解，使酯链断裂，因此只适合 于不含水或醇的流动相体系。 ? (2) Si-R( 或 Si-N) ： 抗水解能力强，热稳定性 比硅酸酯好。但所用的格氏反应不方便。 ? (3) Si-O-Si-R ： 不 水 解 ， 热 稳 定 性 好 ， 在 pH=2-8 范围内对水稳定。 注意事项：化学键合固定相不适于酸、碱度过大 或含有氧化剂的缓冲溶液作流动相。 ( 四 ) 原理 这种固定相分离机理既不是简 单的吸附，也不