药品生物检定技术3.2玫瑰红钠琼脂培养基制备操作规程第16讲玫瑰红钠琼脂培养基制备操作规程.pptxVIP

药品质量与安全专业教学资源库药品生物检验技术微生物数量检查技术 贺立虎 副教授知识点项目八 微生物数量检查技术任务3 培养基制备及其适用性检查技能点1 玫瑰红钠琼脂培养基制备操作规程玫瑰红钠琼脂培养基制备操作规程1玫瑰红钠琼脂培养基1.1用途供药品和生物制品中霉菌和酵母菌的计数、分离和培养用(《中华人民共和国药典》2010年版)。　玫瑰红钠琼脂培养基制备操作规程1.2原 理胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;磷酸二氢钾为缓冲剂;硫酸镁提供必须的微量元素;玫瑰红钠作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长;琼脂是培养基的凝固剂。1.3配方蛋白胨 10g　牛肉膏粉 3g　氯化钠 5g　琼脂 15g 最终pH 7.3±0.2玫瑰红钠琼脂培养基制备操作规程1.4使用方法(计数用法)1.4.1称取本品30.5g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121℃高压灭菌20min。1.4.2检样的稀释处理 取2～3支灭菌试管，分别加入9mpH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液灭菌稀释剂(此时操作一般为：左手执试管并将塞打开，倾斜，右手执10ml吸管吸量。切勿在酒精灯火焰的正上方操作，以免火焰将供试液中的菌细胞杀灭)。加稀释剂后，试管塞应立即塞上。 玫瑰红钠琼脂培养基制备操作规程1.4.3根据对样品污染情况的估计，选择3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2 ～ 3个平皿。 1.4.4 将凉至45℃左右的培养基约15mL注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于20—25℃温箱中培养72h，对于菌落微小点计困难的平板可延续培养到4—5d再进行观察计数。 玫瑰红钠琼脂培养基制备操作规程1.5计数、报告1.5.1计数 一般情况下，玫瑰红钠平板计点霉菌或酵母菌数，如在该平板上生长的细菌菌落数多于营养琼脂平板上生长的菌落数时，则应同时点计细菌数，并将该菌数作为供试品的细菌数报告。固体供试品在平板上点计霉菌落数，液体供试品则需在玫瑰红钠琼脂平板上点计/玫瑰红钠琼脂霉菌与酵母菌菌数;含蜂蜜及王浆的合剂需以玫瑰红钠平板的霉菌菌落数加上酵母膏粉胨葡萄糖琼脂平板的酵母菌菌落数作为供试品的霉菌、酵母菌总数。1.5.2报告 通常选择菌落数在30 ～ 100之间的稀释级的平板计数，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告。玫瑰红钠琼脂培养基制备操作规程1.5.3质量控制本品倾注平皿后呈玫瑰红色，下列菌株接种后20—25℃培养72h生长情况如下表。 菌 名 菌 号生长状况 菌落特征黑曲霉 　CMCC(F)98003 良好菌丝白色孢子黑色，底部玫瑰红色白色念珠菌CMCC(B)98001 良好　 菌落表面呈奶油色大肠埃希氏菌CMCC(B)44102 被抑制 ——