药物分离纯化技术醋酸纤维素薄膜电泳7电泳法分离蛋白质.pptxVIP

(二）三大效应：浓缩效应电荷效应分子筛效应成分pH值孔径电泳缓冲液甘氨酸(慢离子)8.3样品蛋白质6.7浓缩胶Cl-(快离子)6.7大分离胶Cl-(快离子)8.9小有效迁移率 = 迁移率 ? 解离度浓缩效应（1）缓冲液离子成分、PH的不连续性：电极缓冲液的pH=8.3，甘氨酸的电离小，有效迁移率小，称为慢离子；浓缩胶中的氯离子完全电离，有效迁移率大，称为快离子；蛋白质在浓缩胶中介于二者之间。电泳开始后，氯离子跑得最快，留下一段低电导区，产生高电位梯度（电位与电导率成反比），使甘氨酸离子追赶氯离子，当二者速度相等时，形成一个不断向正极移动的界面，蛋白质夹在中间而被压缩。（2）凝胶孔径的不连续性：在电场作用下，蛋白质颗粒在大孔胶中阻力小，速度快，进小孔胶时，阻力大，速度慢，在两胶交界处，因迁移受阻而被压缩。操作步骤：1.制备PAGE胶柱封口灌分离胶，封水灌浓缩胶，封水2.上样，电泳3. 染色，观察结果2.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于测定蛋白质亚基分子量以及未知蛋白质分子量的测定；特点：设备简单、操作简便、测定快速、重复性高、样品无需纯化。蛋白质样品用SDS处理后亚基的解聚和分子形状的改变未知蛋白质分子量的测定基于上述SDS的原理介绍，我们可以利用SDS电泳进行未知蛋白质的分子量测定；以不同分子量的标准蛋白进行SDS电泳得到不同标准蛋白的电泳迁移率，制作标准校正曲线，然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS电泳，测定迁移率，从标准曲线得到相应的分子量；在一定的凝胶浓度下，多肽链分子量的对数与多肽链的相对迁移率成线性关系，所以可以通过标准曲线求未知多肽链分子量。标准蛋白分子量未知蛋白 相对迁移率水平式电泳装置电泳缓冲液凝胶