食品理化检验技术（新） 分光光度法—测定食品中磷的含量 分光光度法-测定食品中磷的含量-2.pptxVIP

分光光度法—测定食品中磷的含量 2 钼蓝分光光度法 3 4 一、测定原理 试样经消解,磷在酸性条件下与钼酸铵结合生成磷钼酸铵,此化合物被对苯二酚、亚硫酸钠或氯化亚锡、硫酸肼还原成蓝色化合物钼蓝。 钥蓝在660nm 处的吸光度值与磷的浓度成正比。 用分光光度计测定试样溶液的吸光度,与标准系列比较定量。 钼蓝分光光度法 5 钼蓝分光光度法 二、仪器试剂 1、仪器 分光光度计 可调式电热板或 可调式电热炉 马弗炉 分析天平: 感量0.1mg和1mg 6 钼蓝分光光度法 二、仪器试剂 2、试剂 硫酸(H2SO4) 高氯酸(HClO4) 硝酸(HNO3) 盐酸(HCl) 对苯二酚(C6H6O2) 7 钼蓝分光光度法 二、仪器试剂 2、试剂 无水亚硫酸钠 钼酸铵 氯化亚锡 硫酸肼 8 硫酸溶液(15%) 量取15mL硫酸,缓慢加入到80mL水中,冷却后用水稀释至100mL,混匀。 硫酸溶液(5%) 量取5mL硫酸,缓慢加入到90mL水中,冷却后用水稀释至100mL,混匀。 硫酸溶液(3%) 量取3mL硫酸,缓慢加入到90mL水中,冷却后用水稀释至100mL,混匀。 盐酸溶液(1+1) 量取500mL盐酸,加入500mL水,混匀。 钼酸铵溶液(50g/L) 称取5g钼酸铵,加硫酸溶液(15%)溶解,并稀释至100mL,混匀。 对苯二酚溶液(5g/L) 称取0.5g对苯二酚于100mL水中,使其溶解,并加入一滴硫酸,混匀。 钼蓝分光光度法 三、试剂配置 9 亚硫酸钠溶液(200g/L) 称取20g无水亚硫酸钠溶解于100mL水中,混匀。 临用时配制。 氯化亚锡-硫酸肼溶液 称取 0.1g氯化亚锡,0.2g硫酸肼,加硫酸溶液(3%) 并用其稀释至100mL。 此溶液置棕色瓶中,贮于4 ℃可保存1个月。 磷标准储备液(100.0mg/L) 准确称取在105 ℃下干燥至恒重的磷酸二氢钾0.4394g(精确至0.0001g)置于烧杯中,加入适量水溶解并转移至1000mL容量瓶中,加水定容至刻度,混匀。 磷标准使用液(10.0mg/L) 准确吸取10mL磷标准储备液(100.0mg/L),置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,混匀。 钼蓝分光光度法 三、试剂配置 10 在采样和试样制备过程中,应避免污染。 钼蓝分光光度法 四、分析步骤 1、试样制备 11 （1）湿法消解 称取试样0.2g~3g(精确至0.001g)或准确吸取液体试样0.500mL~5.00mL于带刻度消化管中,加入10mL硝酸,1mL高氯酸,2mL硫酸,在可调式电热炉上消解(参考条件:120 ℃/0.5h~1h、升至180 ℃/2h~4h、升至200 ℃~220 ℃)。 若消化液呈棕褐色,再加硝酸,消解至冒白烟,消化液呈无色透明或略带黄色。 消化液放冷,加20mL水,赶酸。 放冷后转移至100mL容量瓶中,用水多次洗涤消化管,合并洗液于容量瓶中,加水至刻度,混匀。 作为试样测定溶液。 同时做试剂空白试验。 亦可采用锥形瓶,于可调式电热板上,按上述操作方法进行湿法消解。 钼蓝分光光度法 四、分析步骤 2、试样前处理 加入10ml硝酸 准确称取试样 加入1ml高氯酸 加入2ml硫酸 在可调式电热炉上消解 12 （2）干法灰化 称取试样0.5g~5g(精确至0.001g)或准确移取液体试样0.500mL~10.0mL,在火上灼烧成炭分,再于550℃下成灰分,直至灰分呈白色为止(必要时,可在加入浓硝酸润湿蒸干后再灰化),加10mL盐酸溶液(1+1),在水浴上蒸干。 再加2mL盐酸溶液(1+1),用水分次数将残渣完全洗入100mL容量瓶中,并用水稀释至刻度,摇匀。 同时做试剂空白试验。 钼蓝分光光度法 四、分析步骤 2、试样前处理 于550℃下灰分呈白色 准确称取试样 在水浴上蒸干 加2ml盐酸溶液 转移入100ml容量瓶中 用水稀释至刻度，摇匀 同时做空白试验 13 （1） 对苯二酚、亚硫酸钠还原法 标准曲线的制作 准确吸取磷标准使用液0mL、0.500mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL,相当于含磷量0μg、5.00μg、10.0μg、20.0μg、30.0μg、40.0μg、50.0μg,分别置于25mL具塞试管中,依次加入2mL 钼酸铵溶液(50g/L) 摇匀,静置。 加入 1 mL 亚硫酸钠溶液 (200g/L)、1 mL 对苯二酚溶液(5g/L), 摇匀。 加水至刻度,混匀。 静置0.5h后,用1cm 比色杯,在660nm 波长处,以零管作参比,测定吸光度,以测出的吸光度对磷含量绘制标准曲线。 钼蓝分光光度法