胶体金技术 讲座.pptVIP

胶体金免疫层析技术 (colloidal gold immunochromatography assay, GICA) 目录 免疫胶体金技术的发展历史及应用 、胶体金检测卡的基本原理及构造 免疫胶体金层析法检测原理及应用 四、岱-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍 五、常见问题分析与注意事项 六、瘦肉精检测卡性能指标检测(以CLE为例) 免疫胶体金技术的发展历史 及应用 1.1939年(英,植物) Kausch和 Ruska把烟草叶病毒吸附在金颗粒上 在电子显微镜下观察呈现高电子密度的细状颗粒,开启了免疫胶体金 技术的研究。 2.1971年(美,微生物) Faulk和 Taylor首先将兔抗沙门菌抗血清与胶 体金颗粒结合,用值于检测沙门菌的表面抗原 3.1974年(奥) Romano等捋胶体金标记在马抗人IgG上,实现了间接免 疫金染色法。同年 Bauer等报道将胶体金标记在凝集素上的应用。 4.1978年 Geoghegan等应用免疫金技术检测B淋巴细胞表面抗原。 5.1981年 Danscher建立了银显影液增强光镜下金颗粒的免疫金银染色方法 Immunogold-silver staining, IGSS)o 6.1986年 Fritz(美,生物)等人在IGSS法基础上成功地进行了彩色IGSS的 染色法,使得检测结果更加鲜艳夺目一这是免疫金检测技术诞生的一次 历程碑1 二、胶体金检测卡的基本原理及构造 胶体金( colloidal gold)也称金溶胶( goldso1),是金盐被 还原成原子金后形成的金颗粒悬液 e s0353:c 1t8482r0 基础金核 双离子内层负离子(AUC12-)zeta电位 外层离子层H+分散在胶体间的溶液中 zeta电位可以使胶体金颗粒之间相互排斥,以维持胶体金的稳定状态 胶体金颗粒对蛋白质有很强的吸附功能,而不 被坏其生物活性,可以与蛋白质等(葡萄球菌 A蛋白、免疫球蛋白)等非共价结合,形成胶 体金标记物 赖氨酸 Lysine+( a) charge vely chargea 色氨酸 Tryptophan E3 (b) hydrophobic 半就氨酸 Cysteine SH() dative sera box Fab 胶体金试纸条的构造 胶体金垫 样品垫 控制线(c线)吸水滤纸 层析方向 PVc底板 测试线(T线)NC膜(硝酸纤维素膜) 三、免疫胶体金层析法检测原理及应用 G|CA有三种反应模式:夹心法,间接 法,竞争抑制法 夹心法反应原理 首先将已知的特异性抗体(单抗或多抗)以一定的量包被于膜上作 为检测线,可与金标物结合的二抗作为质控线,与包被抗体相配对的 另一单抗则标记于金标垫上。检测时,如标本中有待测抗原,待检抗 原与金标记单抗结合并上行至检测线,再与检测线上特异性抗体结合, 最终形成肉眼可见的红色条带(金颗粒一抗体一抗原一包被抗体), 如样本中无待检抗原,则不能形成肉眼可见的红色条带。无论样本中 是否含有待检物质,质控线都会呈现红色条带