新疆地区牛PCV3的分子流行病学调查与基因特性分析.pdfVIP

摘 要 目的：猪圆环病毒3 型 （porcine circovirustype 3，PCV3）自2016年被美国研究者首次在患病 家猪鉴定出以来，在我国多个省份也报道PCV3 的感染情况。目前在除自然宿主猪以外的其他动物 牛、狗、鼠和蜱等均检出PCV3 的存在，但有关PCV3对新疆地区牛群的感染尚未知晓，为摸清PCV3 在新疆地区牛群感染情况及感染毒株的基因特征，因此本研究对新疆地区规模化牛场PCV3 的感染 情况进行调查。 方法：本试验应用巢氏PCR 的检测方法，对采集自新疆有代表性的13个地区共670份牛血和 组织样品进行PCV3基因检测，并进行核苷酸序列分析；同时结合虎红平板凝集试验与常规PCR 检 测方法，对PCV3 阳性样品样品进行布鲁氏菌病抗体检测以及引起牛繁殖障碍相关疾病的基因检测， 并分析PCV3病毒与其他病原之间的关系。选取有代表性的PCV3 阳性样品进行全基因扩增、测序 与拼接，并对全基因序列进行分析。应用实验室提供的PCV3 Cap 重组蛋白作为抗原，初步建立间 接ELISA-PCV3抗体的检测方法，检测牛血清样品PCV3 感染的抗体水平，并对结果进行统计。 结果：（1）选取的13个地区670份样品共检测出PCV3 阳性样品131份，平均阳性率为19.55% （131/670），各地区规模化牛场均检测到PCV3 的存在，其阳性率为5.00%-35.00%；对30 头牛的 不同组织检测发现其阳性率为10.00%-26.67%，其中淋巴结组织感染的阳性率最高为26.67%（8/30）； 在不同生长阶段牛群的PCV3平均阳性率为12.50% （15/120），其中1岁牛感染的阳性率最高，为 33.33% （4/12）。通过调查PCV3 与其他病原之间的混合感染情况，发现PCV3 在牛群中存在单独 感染的情况，其阳性检出率为61.83% （81/131）；PCV3 与BVDV、BHV-1、BPIV-3 之间二重感染 的阳性率在 10.69% -33.59%之间；PCV3 与BVDV、BHV-1、BPIV-3 之间多重感染的阳性率在5.34% -9.16%之间。 （2）本研究得到的10 株PCV3全基因组序列，其核苷酸序列之间有较高的同源性为 98.4%-99.8%，与国内外其他PCV3 参考毒株的同源性在96.3%-99.7%之间。经遗传进化分析发现， 有5株PCV3全基因序列与美国毒株PCV3-US-MN2016 处于同一分支，属于3a 亚群；有2 株PCV3 全基因序列与韩国株 PCV3-KU-1607 处于同一分支，同属于3b 亚群；剩余3 株PCV3 全基因序列 与中国株PCV3-CN-FuJian-318-2017 处于同一分支，同属于3c 亚群。10 株PCV3Cap 蛋白之间的理 化特性相似，均没有信号肽且属于亲水性蛋白，且预测的磷酸化位点均一致。（3）经初步建立的间 接ELISA-PCV3 抗体检测结果显示，平均抗体阳性率为63.75% （408/640）。从不同生长阶段PCV3 抗体阳性率来看，其平均抗体阳性率为57.50% （69/120），表明牛群在生长过程中存在PCV3 感染 的可能。 结论：本试验在新疆牛群中首次检测到PCV3 的存在，并发现PCV3 病毒已在新疆地区的牛群 中存在，可分布在感染牛群的不同组织中，同时在牛群的不同生长阶段都有感染该病毒的可能，PCV3 病毒在牛群中存在单独、二重和多重感染的情况，表明PCV3对牛群健康可能存在潜在威胁；本研 究获得的PCV3 全基因组序列之间有较高的同源性，遗传基因具有一定的多样性；初步建立的间接 ELISA-PCV3抗体检测方法具有一定的可靠性，为血清学检测提供便利。 关键词：猪圆环病毒3 型；牛；基因组；遗传进化分析；共感染；间接ELISA I Abstract Objective:Porcine circovirus type 3(PCV3) had been identified in domestic pigs for the first time by USresearchers since 2016.PCV3 infection had alsobeen reported in many provinces of China.At present, PCV3