石蒜碱及联合阿苯达唑体外抗细粒棘球蚴原头节的作用研究.pdfVIP

摘要 目的：通过对石蒜碱、石蒜碱联合阿苯达唑在体外处理细粒棘球蚴原头节活性率的比较， 探究石蒜碱在体外是否具抗细粒棘球原头节的药理活性，并进一步探讨石蒜碱抗细粒棘 球蚴原头节的相关机制。 方法：从感染羊肝上提取细粒棘球蚴原头节，体外培养 3 天后，分别用石蒜碱（100、 250 、500、750、1000μmol/L ）、石蒜碱联合阿苯达唑（100μmol/L +50μmol/L ）、阿苯达 唑（50μmol/L ）处理细粒棘球蚴原头节，在处理后的第1、3、5、7、9 d，用1% 伊红染 色后观察原头节的活性情况，使用多因素重复测量方差分析检验各组间原头节活性率的 差异；通过蛋白质印迹法（Western Blot ）测量第7 天原头节Bcl-2/Bax ，caspase-3，caspase- 9 表达含量；通过JC-1 荧光探针染色，在荧光显微镜下观测线粒体膜电位变化。 结果：1. 在第9 天，空白对照组与DMSO 组的原头节活性分别为98.48%、98.61%；经 100、250 、500、750、1000μmol/L 的石蒜碱体外作用9 d 后，原头节的活性分别为72.70%、 36.65%、14.09%、1.88%和0% ；石蒜碱处理后的原头节的活性高于对照组差异具有统计 学意义（P ＜0.05 ）；在石蒜碱处理组中，各亚组之间相互比较，差异具有统计学意义（P ＜0.05 ）；在相同浓度石蒜碱处理组内，处理时间越长活性越低，差异具有统计学意义（P ＜0.05 ）。2. 石蒜碱联合阿苯达唑（100 μmol/L +50 μmol/L ）、阿苯达唑（50 μmol/L ）及 低剂量石蒜碱（100 μmol/L ）体外作用9 天后，原头节的活性分别为50.20%、90.22%和 72.70% ；石蒜碱联合阿苯达唑处理后的原头节的存活率与低剂量石蒜碱组（10 μmol/L ） 及阿苯达唑组（50μmol/L ）存在明显差异，差异具有统计学意义（P ＜0.05 ）。3. 在第7 天，空白组和DMSO 组中，原头节表达Bcl-2 、Bax 、caspase-9 和caspase-3 无的水平无 明显差异（P ＜0.05 ）；石蒜碱处理组中原头节的Bax 、caspease-9 和caspease-3 表达量随 药物浓度的增加而上升（P ＜0.05 ），而Bcl-2 的表达量表现出下降（P ＜0.05 ）。4. 在培 养第7 天，空白组与DMSO 组原头节的荧光强度无明显差异，石蒜碱处理组（100、500、 1000μmol/L ）中原头节的荧光强度随着药物浓度的升高而增强。 结论：1. 在体外，石蒜碱具有杀灭细粒棘球蚴原头节的药理效能，且表现出时间和浓度 依赖性。2. 在体外，石蒜碱与阿苯达唑具有协同杀灭细粒棘球蚴原头节的作用。3. 石蒜 碱可通过线粒体途径（Bcl-2/Bax-线粒体损伤-Cyt-c 释放-caspase-9 激活-caspase-3 激活- 凋亡）诱导细粒棘球蚴原头节凋亡。 关键词：石蒜碱；细粒棘球蚴原头节；凋亡 II Abstract Objective: To explore the anti-Echinococcus Granulosus protoscoleces (EgPSC) of lycorine by comparing the efficacy of lycorine, lycorine combined with albendazole and albendazole in vitro. And the mechanism of resistance of lycorine to EgPSC was further investigated. Methods: The protocolizes were collected from Liver hydatid cysts of sheep and cultured for three days in vitro, then treated with lycorine (100μmol/L, 250μmol/L, 500μmol/L, 750μmol/L, 1000μmol/L), lycorine combined with albendazole