小反刍兽疫恒温扩增检测技术规范 DB37_T 4052—2020 山东.pdfVIP

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2020-07-15 发布于河南
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小反刍兽疫恒温扩增检测技术规范 DB37_T 4052—2020 山东.pdf

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ICS 11.220 B 41 DB37 山东省地方标准 DB37/T 4052—2020 小反刍兽疫恒温扩增检测技术规范 Technical specification for isothermal amplification of Peste des petits ruminants 2020 - 07 - 09 发布 2020 - 08 - 09 实施山东省市场监督管理局发布 DB37/T 4052—2020 前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东师范大学、山东省农业科学院、中国动物卫生与流行病学中心、杭州众测生物科技有限公司、桂林市临桂区动物疫病预防控制中心。本标准主要起草人：陈蕾、孙文博、吴晓东、陈艳如、廖炳次、蒋文明、李华、刘腾腾、杨慧婷、单世娟、陈秋红、孙晓洁、杨桂文。 I DB37/T 4052—2020 小反刍兽疫恒温扩增检测技术规范 1 范围本标准规定了小反刍兽疫（PPR）的恒温核酸扩增检测技术的要求。本标准适用于小反刍兽疫的快速检测、诊断、检疫、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489—2008 实验室生物安全通用要求 NY/T 541—2016 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 原理核酸恒温扩增技术是依赖解旋酶解开双链DNA，再依赖单链DNA结合蛋白与模板单链结合，使模板单链处于单链状态并保护它的完整性。引物与模板杂交，然后在DNA聚合酶的催化下扩增。 4 试剂或材料除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。 4.1 水：符合 GB/T 6682 中规定的一级水。 4.2 1×PBS 溶液（pH 值 7.4）配制见附录A.1。 4.3 核酸提取试剂： a) Trizol； b) 氯仿； c) 75 %乙醇； d) 异丙醇。 4.4 恒温扩增试剂盒。 4.5 不含 RNA 酶的水：DEPC 处理过的不含 RNA 酶的水。 4.6 恒温扩增检测引物：恒温扩增检测引物表 B.1。 4.7 无水乙醇。 4.8 微量移液器配套的带滤芯吸头。 4.9 离心管：1.5 mL。 5 材料及设备 1 DB37/T 4052—2020 主要仪器设备： a) 微量移液器：10 μL、20 μL、100 μL、1 000 μL； b) 高速台式离心机：离心力≥8 000 g； c) 生物安全柜； d) 冰箱； e) 涡旋振荡器； f) 研磨管； g) 荧光定量 PCR 仪； h) 天