猪圆环病毒3型聚合酶链式反应检测方法 DB37_T 4047—2020 山东.pdfVIP

ICS 11.220 B 41 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB37/T 4047—2020 猪圆环病毒3 型聚合酶链式反应检测方法 Detecting porcine circovirus 3 with polymerase chain reaction 2020 - 07 - 09 发布 2020 - 08 - 09 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 4047—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人：李俊、时建立、彭喆、徐绍建、吴晓燕、刘畅、李琛、孙文博、于江、丛晓燕、 韩红、吴家强、杜以军、陈智。 I DB37/T 4047—2020 猪圆环病毒3 型聚合酶链式反应检测方法 1 范围 本标准规定了猪圆环病毒3型（Porcine Circovirus Type 3，PCV3）的聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）试验方法。 本标准适用于猪圆环病毒3型的快速诊断、检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 541—2016 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 原理 聚合酶链反应或多聚酶链反应（Polymerase Chain Reaction，PCR），又称无细胞克隆技术，是一 种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的方法。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成，以dNTP 为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半 保留复制链，重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，经过25～30个循环 后，理论上可使基因扩增109倍以上。每完成一个循环需2 min～4 min，2 h～3 h就能将待扩目的基因 扩增放大几百万倍。 4 试剂和材料 4.1 水：GB/T 6682，一级水。 4.2 蛋白酶 K 溶液（20 mg/mL）：配制见附录A.1。 4.3 10 %十二烷基硫酸钠（SDS 溶液，pH7.2）：配制见附录A.2。 4.4 Tris 平衡酚。 4.5 三氯甲烷。 4.6 无水乙醇。 4.7 70 %乙醇：配制见附录A.3。 4.8 0.5×TBE 缓冲液：配制见附录 A.4。 4.9 电泳级 1 %琼脂糖：配制见附录 A.5。 4.10 DNA 核酸染料。 4.11 DNA Marker 2000。 4.12 引物： ——P1：5’-TACCACAGAAGGCGCTATGTCG-3’； 1 DB37/T 4047—2020 ——P2：5’-ATCC