环境生物技术实验报告.docxVIP

硝基苯降解实验 一、实验目的 1.了解并掌握硝基苯降解实验步骤。 2.掌握液态硝基苯降解菌的接种与培养。 3.掌握生长曲线的绘制。 二、实验材料 硝基苯降解菌菌液、4.301Na2HPO4·12H20(3.8g)、KH2PO4(1.0g)、MgSO4·2H20(0.2gh,KCl(3.0g). 微量元素、83μl (100mg/L)硝基苯 三、实验步骤 培养基的配制 Na2HPO4 ·12H20(3.8g)，KH2PO4(1.0g)，MgSO4·2H20(0.316g)，KCl(3.0g)。将其溶于烧杯后置于1L 容量瓶中，加入10ml微量元素及83μL (100mg/L) 硝基苯，定容，得到降解菌液态培养基。 硝基苯降解菌的接种与培养 取100ml培养基倒入干净的三角瓶中，用移液枪取200μl原菌液接种至三角瓶中，盖上封口膜，于摇床中培养。 菌液取样及测液相 利用注射器向刚接种的培养基中抽取0.8ml的菌液，通过滤头(0.22um)将其注入离心管(1ml) 中，另取注射器抽取0.8ml甲醇于离心管中，离心混合，将混合液再次抽取后透过滤头注入安吉伦小瓶中，封盖。每隔6-8h取次样，共取5次。利用液相色谱仪测取样品，绘制浓度与时间之间的曲线。 降解菌的生长曲线 从0h开始，每隔6-8h取菌液，利用紫外分光光度计(590nm),记录Abs,绘制降解菌生长状况随时间变化的曲线。(共取5个点) （a）0h （b）7h （c）17h （d）23h （e）29h 图1液态硝基苯降解菌生长 四、数据处理 表1硝基苯降解菌菌液生长曲线 时间/h 0 7 17 23 29 吸光度 0.005 0.007 0.097 0.131 0.121 图2硝基苯降解菌生长曲线 表2硝基苯降解菌菌液降解硝基苯浓度表 时间/h 0 7 17 23 29 硝基苯浓度（mg/L） 16.47 14.28 5.38 0 0 图3硝基苯降解菌菌液降解硝基苯曲线 五、结果与讨论 由硝基苯的生长曲线可知：在0-23h时间内菌的浓度随时间增长而增长，生长速率逐渐减小，菌浓度在生长23h时菌浓度达到最大值，随后下降； 由硝基苯降解菌菌液降解硝基苯曲线可知：硝基苯的浓度随着时间的增长而减小，在23h时被降解完全； 由硝基苯降解菌的生长曲线与菌液降解硝基苯曲线可知：在0-23h时间段硝基苯浓度高，硝基苯降解菌利用硝基苯作为碳源进行生命活动，大量繁殖。随着硝基苯降解菌的生长，硝基苯浓度逐渐减小，生长速率也随之减小，在23h硝基苯被消耗完全，硝基苯降解菌的生长速率也达到最小，浓度达到最大。 微生物固定化 实验目的 掌握微生物固定化的实验方法。 实验材料 见原纸 实验步骤 草炭上-PPVA的制备条件为:按照草炭上（0.18-0.83 mm) ：10%PVA=4060(v/v)的比例制成混合物，加入1g/L离心收集的降解菌，混匀后例入塑料托盘中，厚度约为5mm,在其上:覆盖约5mm的含有1.25 molL NaH2PO4和1.25 mol.Na2HPO4的磷酸盐溶液，于30℃反应24h后，切成5mm× 5mm的小块。 采用聚乙烯醇和草炭土混合物为固定化原料。 制备小球的步骤： 将200g聚乙烯醉溶手IL的蒸馏水中，在90C水浴锅中水浴完全溶解； 筛选草炭土，选择粒径为0.18-0.83 mm; 对降解菌进行离心收集，井用无菌水清洗多次后使用: 草炭土与10%的PVA体积比为=40： 60 (v/v)的比例制成混合物。搅村均匀，加入1g/L离心收集的降解菌，混匀。 配制1.25 mol/L NaH2PO4和1.25 mol/L Na2HPO4的混合磷酸盐溶液。加热溶解。 将4中的混合物倒入塑料托盘中，厚度约为5mm.用喷麦喷洒磷酸盐溶液，使其覆盖约5mm,用保鲜膜密封，于30℃静止24h后，切成5mm×5mm的小块。 取一小块放入干净的三角瓶中，盖上封口膜，于摇床中培养。 利用注射器向刚接种的培养基中抽取0.8ml的菌液，通过滤头(0.22um)将其注入离心管(1ml) 中，另取注射器抽取0.8ml甲醇于离心管中，离心混合，将混合液再次抽取后透过滤头注入安吉伦小瓶中，封盖。每隔6-8h取次样，共取5次。利用液相色谱仪测取样品，绘制浓度与时间之间的曲线。 （a）0h （b）7h （c）17h （d）23h （e）29h 图4固定化后硝基苯降解菌降解硝基苯 实验结果与数据处理 表3硝基苯菌菌块降解硝基苯浓度数据 时间/h 0 7 17 23 29 硝基苯浓度mg/L 16.45 9.46 7.33 5.23 4.61 图5硝基苯降解菌菌块降解硝基苯曲线 五、结果与