课件：二蛋白质化学.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 三、蛋白质含量的测定 1.凯氏定氮法 3.紫外吸收法：由于核酸在260nm具有光吸收，对测定干扰较大，可采用280nm、260nm同测法。 蛋白质浓度mg/mL＝1.45A280-0.74A260 2.考马斯亮蓝法：考马斯亮蓝G250是一种带有负电荷的染料，在酸性条件下，与蛋白质上的正电荷结合，形成蓝色化合物，在595nm具有特定吸收。该反应简便、快速。 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 根据下面给出的信息，确定肽链中氨基酸的序列： 1.酸水解得Val，Phe，Gly，Arg，Ile，Met，Thr。 2. Sanger试剂处理得 DNP-Gly。 3. 胰蛋白酶处理得Gly 、Arg、Thr和Ile、Met、Phe、Val；当以Sanger试剂处理时分别得到DNP-Gly 和DNP-Val。 4.溴化氰处理得Gly 、Arg、高丝氨酸内酯、Thr、Val和Ile、 Phe；当用Sanger试剂处理时，分别得DNP-Gly 和DNP-Ile。 自测题 答案：Gly-Thr-Arg-Val-Met-Ile-Phe （三）蛋白质一级结构与生物学功能 1 蛋白质的一级结构决定其高级结构 一级结构与分子病 镰刀状贫血是由遗传基因的突变导致血红蛋白分子一级结构突变引起的。血红蛋白分子β- 链上的第六位谷氨酸被缬氨酸所替代，使血红蛋白分子空间结构发生一些变化。 同源蛋白质：不同种属中执行同一功能的蛋白质。如牛、兔等的血红蛋白都有运输氧的功能。 2 蛋白质的一级结构差异越小，其功能的相似性越大。 3 一级结构上的细微变化可直接影响其功能 定义：蛋白质主链的折叠产生由氢键维系的有规则的构象。 主要有?-螺旋、?-折叠、?-转角和无规则卷曲。 1 无规则卷曲：是无一定规律的结构，但这些部位往往是蛋白质功能或构象变化的重要区域。 二、蛋白质的二级结构 2 ?-螺旋 左手和右手螺旋 Page 42 每圈螺旋占3.6个氨基酸残基，沿螺旋方向上升0.54nm。每个残基绕轴旋转100°，沿轴上升0.15nm。 ?-螺旋结构的稳定主要靠链内的氢键。 大多数蛋白质中存在的?-螺旋均为右手螺旋。 3 ?-折叠（ ?-折叠片） 由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链间的氢键交联而形成。肽链的主链呈锯齿状折叠构象。 平行 反平行 Page 43 4 ?-转角 弯曲处的第1个氨基酸残基的C=O 和第4个残基的N–H之间形成氢键，产生一种很不稳定的环形结构。 在蛋白质中由若干相邻的二级结构组合在一起，彼此相互作用，形成有规则、在空间上能辨认的二级结构组合体。 主要有三种:??、???、???。 超二级结构 超二级结构在结构层次上高于二级结构，但没有聚集成具有功能的结构域。 结构域：多肽链在二级结构或超二级结构的基础上形成三级结构的局部折叠区，它是相对独立的紧密球状实体。 定义：在二级结构基础上，肽链的不同区段的侧链基团相互作用在空间进一步盘绕、折叠形成的包括主链和侧链构象在内的特征三维结构。 三、蛋白质的三级结构 肌红蛋白 四、蛋白质的四级结构 四级结构：自然界中很多蛋白质是以独立折叠的球 状蛋白质的聚集体形式存在的。这些球状蛋白质通 过非共价键彼此缔合在一起。缔合形成聚集体的方 式构成蛋白质的四级结构。 亚基：四级结构的蛋白质中每个球状蛋白称为亚基，亚基一般是一条多肽链。 二聚体蛋白: 由两个亚基组成的蛋白。 寡聚蛋白质：由两个或两个以上亚基组成的蛋白质。寡聚蛋白包括许多很重要的酶和转运蛋白。 两个亚基的结构 血红蛋白含有四条肽链，每一条肽链各与一个血红素相连接。血红素同肽链的连接是血红素的Fe原子以配价键与肽链分子中的组氨酸咪唑基的氮原子相连。 血红蛋白 五、维系蛋白质结构的作用力　 　　 维系蛋白质分子一级结构：肽键、二硫键 维系蛋白质分子二级结构：氢键 维系蛋白质分子三级结构：疏水相互作用力、氢键、范德华力、盐键 维系蛋白质分子四级结构：范德华力、盐键 a盐键（离子键 ） b氢键 c疏水相互作用力 d 范德华力 e二硫键 f 酯键 一级结构→二级结构→超二级结构→结构域→三级结构→亚基→四级结构 第五节 蛋白质的性质 一、蛋白质的两性解离和电泳现象 二、蛋白质的胶体性质 三、蛋白质的沉淀作用 四、蛋白质的变性 五、蛋白质的紫外吸收 六