霍乱毒素B亚单位基因在胡萝卜中的表达-植物学专业论文.docxVIP

甘肃农业大学2008届硕士论文 甘肃农业大学2008届硕士论文 英文缩略词 英文缩略词 缩写 英文名称 中文名称 鼗 Ammonium persulfate 过硫酸胺 bp base pair 碱基对 BSA Bovine serum albumin 牛血清白蛋白 Carb Carbenicllin 羧卞青霉素 CaMV Cauliflower mosaic virus 花椰菜花叶病毒 Cef Cephamycin 头孢霉素 CTAB Hexadecyl—trimethyl—ammonium bromide 十六烷基三甲基溴化铵 CTB Cholera toxin B subunit 霍乱毒素B亚单位 dNTP deoxyribonucleoside triphosphate 脱氧核糖核苷三磷酸 EB ethidium bromide 溴化乙锭 EDTA Ethylene Diamine Tetraacetic Acid 乙二铵四乙酸 ELISA enzyme—linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附法 HRP horseradish peroxidase 辣根过氧化物酶 lBA indole·-3·-butytric acid 3．吲哚丁酸 gus 13-glucuronidase 13。葡糖苷酸酶 Kan kanamycin 卡那霉素 KT kinetin 激动素 nOS nopaline synthase 胭脂碱合成酶 nptII neomycin phosphotransferase II 新霉素磷酸转移酶 OD Optical density 光密度 PAGE polyacrylamide gel electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 PBS Phosphate buffer solution PBS缓冲液 PCR polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 PVP polyvinylpyrolidone 聚乙烯吡咯烷酮 SDS Sodium dodecyl sulfate 十二烷基磺酸钠 Tris Tri(shydroxymethyl)aminomethane 三羟甲基氨基甲烷 TEMED N，N，N，N-tetramethylethylenediamine N，N，N，N-四甲基乙二胺 TMB 3，3’5，5-TetramethylBenzidine dihydrochloride 3，5’5，5’．四甲基联苯胺二盐酸 2，4-D 2,4一dichlorophenoxy acetic acid 2，4．二氯苯氧基乙酸 3 甘肃农业大学2008届硕士论文 甘肃农业大学2008届硕士论文 独创性声明 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得甘肃农业大学或其他教育机构的学位或证书而使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说 明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 47 甘肃农业大学2008届硕士论文 甘肃农业大学2008届硕士论文 摘要 摘要 霍乱是由霍乱弧菌引起的一种烈性肠道传染病，是世界七大流行病之一，为我国甲 类法定传染病，具有发病急、传播快、波及面广等特点，危害极其严重。自1817年发现 霍乱以来，已发生过7次世界性的大流行，因此其预防和控制受到各国政府的高度重视。 预防霍乱发生的有效方式除了有赖于安全水源和提高卫生条件外，更为重要的是发展廉 价实用的霍乱疫苗。现有疫苗费用昂贵，贮存、运输相当困难，因此，研制成本低、使 用简单、易于贮存运输的新疫苗是疫苗研究的一大热点。 植物基因工程技术的不断成熟为新型疫苗的研究提供了新的思路。转基因植物产生 的疫苗，可由人体简单摄食含该种疫苗的植物组织，通过刺激机体黏膜的特异性免疫应 答，使人体获得较持久的疾病防御能力。由于成本低廉、无需冷藏、无需一次性针头、 使用方便，因此，“植物口服疫苗’’得到了世界卫生组织(WHO)的提倡，开展这方面 的研究对推动全球免疫计划的实施具有重要的意义。 本研究利用植物DNA重组技术，以胡萝卜下胚轴为受体材料，采用农杆菌介导法将 霍乱毒素B亚单位基因(CTB)导入到胡萝卜中，得到了转CTB基因的To代植株110 棵，通过穴盘播种Tl代种子得到Tl代植株172棵。分别用通用引物和特异引物，对获得 的卡那霉素抗性植株进行了PCR检测筛选。110株To代植株中引物nl／n2检测出90株为 阳性，阳性率达到81．8％，pl／p2和cl／c2检测阳性率分别为72