含CD和ES融合基因重组腺病毒的构建和体外抑瘤作用的研究-病原生物学专业论文.docxVIP

天津医科大学硕十学位论文英文缩略语 天津医科大学硕十学位论文 英文缩略语 5．FC 5-fluorocytosine 5一氟胞嘧啶 5．FU 5-fiuorouracil 5．氟尿嘧啶 Ad．LacZ AdCMv-LacZ 含半乳糖苷酶基因的腺病毒 Amp ampicillin 氨苄霉素 bp base pair 碱基对 CD eytosme deaminase 胞嘧啶脱氨酶 CPE cytopathic effect 细胞病变效应 DMEM Dulbecco’S Modified Eagle 改良Eagle培养基 medium DMSo dimethyl sulphoside 二甲基亚砜 ECGF endothelial cell growth 内皮细胞生长因子 factor EDTA ethylenediaminetetra acetic 乙二氨四乙酸 acid ES endostatin 内皮抑素 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 GFP green fluorescent protein 绿色荧光蛋白 Hela cervicfl cell carcinoma of 人宫颈癌细胞 human Kana kanamycin 卡那霉素 LB Luria．Balani medium LB培养基 MTT 3一(4，5-dimethythiazoyl-2一y1 四甲基偶氮唑盐 )一2，5-diphenyl tetrazolium bromide oD optical density 吸光度 pAdEasy一1 plasmid adenovirus Easy一1 E1缺失腺病毒骨架质粒 天津医科大学硕士学位论文———————————————————_———————————————————————————————-———————————————————一 天津医科大学硕士学位论文 ———————————————————_———————————————————————————————-———————————————————一 pAdTraek-CMV plasmid adenovirus Track带报告基因的腺病毒穿梭质粒 —：MV PCR polymerase chain reaction 多聚酶链反应 pEZZ-18一ES pEZZ一18 protein A gene 含ES基因的A蛋白融合基因 fused witll ES gene vector 载体质粒 rAd recombinant adenovirus 重组腺病毒 rAd．CD recombinant 含有CD基因的重组腺病毒 adenovirus．E1CMv_CD rAd-CDglyES recombinant 含CDglyES的重组腺病毒 adenovirus·CDglyES RPMI 1640 RPMI medium l 640 RPMI 1640培养基 SDS sodium dodecyl sulfate 十二烷基硫酸钠 SMMC．7721 human hepatic cellular 人肝癌细胞株 carcinoma cell strain 772l Stre streptomycin 链霉素 TCIDso 50％tissue culture 半数组织细胞感染量 infective dose thymidine kinase 胸苷激酶 2 天津医科人学硕I一学位论文含CD和ES融合基因重组腺病毒的构建和体外抑瘤作用的研究 天津医科人学硕I一学位论文 含CD和ES融合基因重组腺病毒的构建和体外抑瘤作用的研究 摘 要 ＼、(肿瘤基因治疗是近十余年发展起来的治疗恶性肿瘤的新方法，但多数临床 试验显示单基因治疗的效果还不能令人十分满意，所以融合基因治疗日趋受到 研究者的重视●本研究是在课题组前期研究的基础上，选用了胞嘧啶脱氨酶 (CD)自杀基因和内皮抑素(Es)基因。CD基因在肿瘤细胞内表达的胞嘧啶 脱氨酶将5-FC转化为5-FU，直接局部破坏瘤细胞；而ES基因在肿瘤细胞内 表达的内皮抑素通过抑制肿瘤新生血管内皮细胞的形成，使之不能形成新生血 管，阻断瘤细胞的氧气和营养物质供应，同时也阻断了肿瘤的远端转移，达到 间接抑瘤作用。本研究将CD和ES基因融合，并插入腺病毒载体构建成具有 直、间接双重抑瘤作用的重组腺病毒。 本研究首先用PCR方法从课题组构建的含CD基因的重组腺病毒 (rAd．CD)中扩增出带有特异插入酶切点的CD基因，将其插入腺病毒穿梭质 粒pAdTrack—CMV中构建成pAdTrackCMV-CD，进行酶切及PCR鉴定。然后 用合成的带有甘氨酸linker的ES基因上、下游引物从前期构建的含ES基因的 原核细胞分泌型表达质粒(p