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临床生化检验相关基础培训 南方医院检验科 曾方银 主要内容 全自动生化分析仪的基本知识 生化分析仪的技术进步 生化试剂 的发展 Olympus全自动生化分析仪的日常维护 标本质量对生化检验的影响 生化检验常用质量控制方法 第 一 部 分 全自动生化分析仪的基本知识 全自动生化分析仪的发展  1957 Technicon第一台单通道、连续流动式 Auto Analyzer  1964 连续多通道自动分析仪(Sequential multiple analyzer)  70年代中期引入电子计算机(SMAC)  高度机械化、自动化的全自动生化分析仪 生化分析仪的分类  自动化程度：全自动、半自动  反应装置结构：连续流动式、分立式、 离心式、袋式  反应方式：普通(液体)、干式生化  复杂程度和功能：小型、中型、大型 生化分析仪的主要构成 样品传送及处理系统  管道(液路)系统  光学系统  数据处理及控制系统 常用生化检测方法  一点终点法 两点终点法 双波长测定法 三点双项同测终点法 连续监测（速率）法  带标准连续监测法  比浊测定法 一点终点法  一定温度下，试剂与样品经过一定反应 时间，反应达到平衡（终点），吸光度 不再变化。依据样品与校准品吸光度变 化的比例，计算出样品浓度的方法。 公式： 校准品浓度/ （校准品吸光度-校准空白吸 光度）=样品浓度/ （样品吸光度-样品空 白） 检测方法  光源发光折射镜折射折射光穿过比 色杯反应液透射光通过干涉滤光片或 光珊分光形成单色光照射光电倍增管 产生电流信号模/数转换微机处 理计算出被检样品含量 两点终点法 即固定时间法。单、双试剂均可，可消除 样品、试剂的颜色、浊度以及一些干扰 物质对测定的干扰。 典型示例 肌酐能与碱性苦味酸盐生成橙红色化合 物。血清中VitC 、丙酮酸、丙酮、葡萄 糖、乙酰乙酸、果糖、氨基马尿酸、蛋 白质、胍基醋酸胺及很多其他物质亦能 与碱性苦味酸生成红色物质，故被称为 假肌酐，约占20%。真性肌酐反应快， 假性肌酐反应慢。测定混合后25s与85s 在500nm的吸光度变化之差，则为特异 反应肌酐浓度。 公式  C=S* [ （Au2-B2 ）- （Au1-B1 ）] /[ （As2-B2 ）- （As1-B1 ）] 双波长测定法 优点： 可通过消除背景(非成色反应形成的吸光 度值)吸收，从而减少样品的颜色和浊度 所产生的影响。 (1).可有效校准样本的混浊、溶血、黄疸等 (2).可对电源波动有补偿效果 双波长测定典型示例  Glu+ATP G-6-P+ADP (HK)  G-6-P +NADPG-6-P-D+NADPH Hb在340和380nm呈现相同吸光度，双波 长测定可消除溶血的影响 无机磷测定亦如此 三点双项同测终点法 在同一比色杯中，先后加入两种试剂与 样品中的两种被测物发生反应，在各反 应达到平衡期时测定，整个测定过程中 进行三次比色，测定两个项目。  如甘油三酯和胆固醇同时测定法 连续监测法（速率法）  酶浓度测定的两种方法： 标记技术直接测定酶蛋白含量  酶活性测定：测定酶催化反应速度，间 接计算出酶含量 酶活性测定的基础  酶浓度（E ）与产物浓度（P）或底物浓 度（S）的变化成正比例 [E]=-K*[S]/t [E]=K*[P]/t 方法学特点 准确度和精密度要求测定产物的生成量 更合理 初速度慢时，底物从100%到99%这一 1%的变化较难测准 产物是从0到1的变化较易检出 酶促反应的几个阶段  底物结合阶段：底物过量，酶与之结合，生