分子诊断学名词解释小知识点【Fro-江苏大学J检验专业】.doc

基因（分子）诊断：采用分子生物学的方法，在DNA水平或RNA水平对基因的结构和功能进行分析，从而对疾病做出诊断的方法。 基因：编码RNA或蛋白质的全部核苷酸序列。 基因组：一个单倍体生物所含有的全部DNA。 基因组学：对所有基因进行基因组作图（包括遗传图谱、物理图谱、转录图谱）、核酸序列分析、基因定位和基因功能分析的一门学科。 结构基因：编码RNA或蛋白质的核苷酸序列。 补充： 假基因：与具有正常功能的基因序列相似，但无转录功能或转录产物无功能的基因。 基因家族：一组功能相似且核苷酸序列具有同源性的基因，可能由某一共同祖先经重复和突变产生，这一组基因即是~。其编码的同源蛋白称为蛋白质家族，具有相似的功能。 【小知识点】 可用于蛋白质分析与鉴定的技术 （一）分离：二维凝胶电泳:由两相组成： 第一相：等电聚焦凝胶电泳， (根据蛋白质电荷差异), 第二相：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，(根据蛋白质分子量差异)分离蛋白质。 ①等电聚焦凝胶电泳；②SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳；③图像分析技术 鉴定 ①质谱技术；②Edman降解；③分子结构分析 补充：【小知识点】 核酸的鉴定和保存 核酸含量鉴定：有紫外分光光度法和荧光光度法 ①紫外分光光度法：在波长260nm左右的紫外光下的读数可用来计算样品中核酸的浓度，每1μg DNA钠盐的吸光度值为0.02，即A260=1时。双链DNA含量为50μg/ml，单链DNA或RNA含量为40μg/ml，单链寡核苷酸含量为33μg/ml ②荧光光度法 核酸纯度测定 ①紫外分光光度法：纯DNA的A260/A280比值为1.8，比值较高说明有RNA污染，比值较低说明有残余蛋白质。A260/A280比值为2.0是高质量RNA的标志，但一般在1.8~2.1之间都可以接受。A230/A260的比值应在0.4~0.5，若比值较高说明有残余盐存在。 ②荧光光度法：RNA变性电泳后可呈现特征性的三条带，原核生物表现为明显可见的23S、16S、5S的rRNA条带，真核生物则由28S、18S的rRNA及5S、5.8S的rRNA和tRNA构成。 核酸完整性鉴定：一般28S（或23S）RNA的荧光强度约为18S（或16S）RNA的2倍，否则提示RNA降解；若加样槽附近有着色条带，则说明有DNA的污染。 核酸的保存 一般将DNA保存于pH8.0的TE缓冲液中，在-70℃可储存5年以上，加入少量氯仿可避免细菌的污染。 以焦碳酸二乙酯水溶解RNA或者在RNA溶液中加入RNA阻抑蛋白等RNA酶抑制剂可延长保存时间；另外RNA以沉淀形式长期保存于70%的乙醇溶液或去离子的甲酰胺溶液中（-20℃） 补充：【小知识点】 酚抽提法提取基因组DNA中各试剂的作用 EDTA为二价金属离子螯合剂，可抑制DNA酶的活性，同时还能降低细胞膜的稳定性； SDS为阴离子去污剂，能引起细胞膜降解，乳化脂质和蛋白质并沉淀，同时还有降解DNA酶的作用； （无DNA酶的）RNA酶：可有效水解RNA； 蛋白酶K起水解蛋白质的作用，可消化DNA酶、DNA上的蛋白质，同时也有裂解细胞的作用。 酚是很强的蛋白质变性剂，也可抑制DNA酶活性；氯仿能加速有机相和水相的分离； 异戊醇则可减少在抽提过程中由于蛋白变性产生的大量气泡。 pH8.0的Tris可使DNA顺利进入水相，避免滞留于蛋白层。 70％乙醇洗涤（除去共沉淀的盐和有机分子） 朊病毒：一种相对分子质量约为27KD的蛋白质（不含核酸），是引起羊瘙痒病的病原体。 基因表达：是指DNA携带的遗传信息通过转录传递给RNA，mRNA通过翻译将基因的遗传信息在细胞内合成具有生物功能的各种蛋白质的过程。（有转录、翻译、调节环节，以转录层次的调节最为重要） 基因表达调控：指对基因组中某一基因或一些功能相近的基因表达的开启、关闭和表达强度的直接调节。 开放阅读框（ORF）：始于起始密码子并终于终止密码子的一串密码子组成的核苷酸序列。 内含子：DNA或RNA中的非编码序列。 外显子：DNA或RNA中的编码序列。 启动子：与RNA聚合酶识别、结合和转录起始所需的DNA序列。 SD序列：mRNA 5′-端在起始密码子AUG 上游 3~11bP处，含A-G 短序列，容易与16 Sr RNA 3′-端含U-C 序列互补配对的序列称为SD 序列。 操纵子：由一组功能相关的结构基因连同其上游调控序列共同构成一个转录单位。 重叠基因：一段DNA序列有两个或两个以上ORF，可以编码两种或两种以上多肽链。 质粒：细菌细胞(类核)染色体以外，能独立复制并稳定遗传的共价闭合环状DNA分子。 【小知识点】质粒DNA通常具有三种构型：超螺旋DNA、线性DNA分子、半开环DNA分子。在琼脂糖凝胶电泳时，其泳动速度由快到慢依次为：超螺旋＞线性＞半开