登革病毒2型外膜E蛋白基因DIII区的表达及其在血清学诊断方面的应用分析-流行病与卫生统计学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 10 登革病毒 2 型外膜 E 蛋白基因 DIII 区的表达及其在 血清学诊断方面的应用研究 摘 要 最近几十年来，由于全球人口数量和流动性持续增加，登革热在全球的流行范 围不断扩大，并已成为目前世界上分布最广、发病最多的虫媒病毒病，对人类健康 造成严重的威胁。由于缺乏疫苗，登革热的防治一直是世界性难题。除了媒介控制 外，感染者的及时发现、隔离以及治疗是目前预防登革热进一步扩散的重要手段， 因此，早期诊断对于登革热的预防控制至关重要。 登革热的早期诊断一直是登革热防治研究领域的热点，相关的实验诊断技术也 在不断发展，包括病毒核酸检测、抗原抗体检测在内的多种实验诊断技术已被应用 于常规的实验检测工作。目前，国外已经有多家试剂公司研制成功并推出了包括酶 联免疫吸附法（ELISA）、胶体金免疫层析法（ICT）等在内的商品化病毒抗体检测试 剂盒，此类试剂盒具有快速、操作简便等特点，为大多数实验室，特别是基层实验 室所采用。近年来，国内虽然也有不少研究机构开展登革病毒抗体检测试剂盒的研 制，并有相关研制的报道，但其实际应用一直没有取得突破，试剂的国产化一直是 国内登革热防控工作的短板。 本课题以登革 2 型病毒外膜蛋白（envelope，E）为研究对象，在其编码基因的 DIII 区上下游各设计 8 条引物，分别引入 Nde I 和 Xho I 两个酶切位点，交叉配对共 扩增出 64 条 DIII 区基因片段，利用 pET30a(+)表达系统在大肠杆菌 BL21（DE3） 中分别克隆和表达，经 SDS和 Western blot 验证其表达含量及重组蛋白的免 疫反应性，筛选表达量大且有较强免疫反应性的重组蛋白抗原进行纯化并建立间接 ELISA 法用以检测登革热 IgM 抗体，为国产试剂提供候选抗原和方法。 为评价实验建立的 ELISA 法检测效果，我们以 Panbio 公司生产的登革热 IgM 检测试剂盒作为对照，选取 112 份临床血清标本进行了初步的试剂评估。检测结果 表明，以 IFA 检测结果为金标准，本研究 ELISA 法检测 IgM 的灵敏度为 94.64%，特 异度为 91.07%；与 Panbio 公司生产试剂盒相比，本研究建立的 ELISA 法检测登革病 毒 IgM 抗体的检测阳性符合率为 92.85%，阴性符合率为 89.29%，总符合率为 91.07%， Kappa 值为 0.8214，提示两检测方法具有较高的一致性，且两种检测方法差异无统 计学意义（χ2=0.3,P0.05）。提示本研究所建立的方法具有较好的应用前景。 关键词：登革病毒，外膜 E 蛋白，DIII 区，免疫反应性，血清学诊断 The expression of dengue virus type 2 envelope domain Ⅲ and its application in serological diagnosis Abstract Due to the dramatically increasing of global population and mobility in recent decades, dengue fever (DF) has expanded geographically to the majority of regions around the world as the most widely-spread arbovirus-borne disease. Since effective vaccines for DF are not available yet, the elevated disease burden of DF has been a worldwide problem of public health. Besides vector control, timely identification of dengue infections, patient isolation and prompt treatment are important strategies in preventing the spread of disease. In particular, early laboratory diagnosis of DF is a critical step in prior to DF prevention and control measures. The early diagnosis of dengue infection has always been a hotspot in the field of DF prevention and control