脂欣康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠TNFαIL1β干预的作用.docVIP

脂欣康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠TNFαIL1β干预的作用 　　摘要：目的观察脂欣康胶囊对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF－α)和白细胞介素1β(IL－1p)的影响。方法将6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组与脂欣康组，相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠为正常对照组。脂欣康组灌服脂欣康胶囊内之药粉，模型组、正常对照组均灌服生理盐水。连续灌胃2周后(8周龄)，各组随机取出半数小鼠，雌雄各半，麻醉后由腹腔静脉抽血。另一部分继续灌胃4周后(12周龄)由腹腔静脉抽血。离心分离血清，ELISA法检测TNF－α和IL－1β。结果灌服2周后，脂欣康组小鼠血清TNF－α和IL－1β显著低于模型组(P＜0.05)，模型组显著高于正常对照组(P＜0.05)；继续用药4周后，TNF－α和IL－1β无明显增高，脂欣康组显著低于模型组(P＜0.05)，模型组显著高于正常对照组(P＜0.05)。结论脂欣康胶囊具有显著抑制ApoE基因敲除小鼠血清TNF－α与II－1β增高的作用。 　　关键词：脂欣康胶囊；载脂蛋白E；基因敲除小鼠；肿瘤坏死因子α；白细胞介素－1β 　　中图分类号：R543.5 R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672―1349(2007)04―0312一02 　　 　　美国科学家1992年利用基因打靶与胚胎干细胞体外培养基础上的基因敲除(gene knockout)技术培育成功的载脂蛋白E(AImE)基因敲除小鼠，在正常饮食下即可形成明显的高脂血症及动脉粥样硬化(AS)病灶，成为研究AS发病机制和干预措施的较理想的动物模型[1－3]。脂欣康胶囊对高脂血症和不稳定型心绞痛有显著疗效，并具有保护血管内皮和抗AS等作用[4]。本研究应用ApoE基因敲除小鼠这种转基因动物模型，探讨中药复方脂欣康胶囊对肿瘤坏死因子α(TNF－α)和白细胞介素1β(IL－1β)的作用，为该制剂用于临床防治AS及相关疾病的机制提供科学依据。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1 材料脂欣康胶囊由济南孟氏生物科技研究所有限公司生产，批准文号：卫食健字(2001)第0010号，批号6周龄ApoE基因敲除小鼠20只，雌雄各半，体重(20±2)g，由北京大学医学部动物科技部从美国Jackson实验室引进繁育。相同遗传背景的6周龄C57BL/6J小鼠20只，雌雄各半，体重(20±2)g，北京协和医科大学动物中心提供。TNF－α和IL－1β的ELISA检测试剂盒购自Biosource公司。 　　1.2 动物分组及给药方法将40只6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为两组：模型组与脂欣康组各20只。相同遗传背景的6周龄正常C57BL/6J小鼠20只为正常对照组。各组动物均喂饲SPF级普通饲料。模型组及正常对照组均灌服生理盐水0.4mL，脂欣康组灌服脂欣康胶囊内的药粉每日每只0.008 g。连续灌胃2周后(8周龄)，各组随机取出半数小鼠，雌雄各半，麻醉后由腹腔静脉取血。另外半数小鼠继续灌胃4周后(12周龄)由腹腔静脉取血。离心分离血清，放入－20℃冰箱保存。TNF－α和IL－1β检测按照ELISA试剂盒说明书严格执行。 　　1.3　统计学处理检测数据采用SPSS 10.0软件处理。各组均数采用q检验。 　　 　　2　结　果 　　 　　模型组小鼠血清TNF－α、IL－1β含量较正常对照组显著增高(P＜0.05)；脂欣康组小鼠血清TNF－α、IL－1β较模型组显著降低(P＜O.05)。脂欣康组给药2周和6周比较无统计学意义(P＞0.05)。详见表1。 　　 　　3　讨　论 　　 　　动脉粥样硬化曾被认为是一个缓慢的脂质积聚过程。自从Ross等[5]提出动脉粥样硬化的损伤反应学说后，越来越多的证据提示动脉粥样硬化过程是一个血管受损伤后的炎症反应过程。炎症反应贯穿了动脉粥样硬化发生、发展的过程。TNF－α主要是巨噬细胞分泌的一种细胞因子，其他类型的细胞如淋巴细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞等在慢性炎症刺激下也具有产生和释放TNF－α的能力[5]。由于TNF－α可引起细胞坏死、血栓形成和新生血管形成，因而认为它是冠状动脉内皮细胞功能紊乱、内膜增厚的始动因素。IL－1是由单核一巨噬细胞分泌的一种多肽，其免疫活性包括促进细胞活化，发挥免疫调节作用，参与炎症反应等。IL－1对细胞膜作用相似，它通过诱导单层重建和黏附蛋白的表达，破坏血凝一抗血凝平衡，形成血管内凝血，使血流减慢、内膜增厚。IL－1还诱导表达内皮黏附分子、细胞间黏附分子等，可促进白细胞黏附于表面。白细胞黏附、聚集使血管内膜增厚，促进AS的形成[6]。IL－1β可明显改变内皮细胞的抗凝血功能；通过诱导前凝血过程，促进血栓形成；增加内皮细