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脂肪组织工程的研究进展 　　成功构建组织工程化脂肪的关键在于：①种子细胞的选定和获取；②具有良好生物降解性和组织相容性的三维支架材料；③种子细胞增殖和分化的微环境。本文就这三方面的研究进展综述如下： 　　 　　1种子细胞的选定和获取 　　选择一种适宜的种子细胞是成功构建组织工程脂肪的前提。干细胞是一类未分化、保持多种分化潜能且长期生存的细胞群。干细胞按其分化阶段的不同，可以分为胚胎干细胞和成体干细胞两类。胚胎干细胞（embryonic stem cells，ESCs）具有多向分化潜能、长期未分化增殖能力和种系传递功能，但其来源不足、体外培养困难、定向诱导存在许多技术问题，用于临床存在免疫排斥、致瘤性和伦理学问题，故限制了临床应用[1]。成体干细胞来源丰富，取材方便，易实现自体取材，可克服宿主免疫排斥反应，故成体干细胞的研究很广泛[2]。成体干细胞的研究主要集中在间充质干细胞，它可来源于各种组织，包括：骨髓、脂肪、肝、脾、胰腺、睾丸、月经血、真皮、牙髓，甚至肺等[3]。其中主要代表是骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞。它们可通过冷冻、干燥、冷冻干燥等三种方法存储[4]。 　　1.1 骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cell，BMSCs）:BMSCs是来源于骨髓间充质的成骨细胞的前体细胞，具有较强的自我增殖能力和多分化潜能，可分化骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞、肌腱细胞和神经细胞等[5-6]。它的表面标记分子已明确，并已用于细胞筛选及计数。分离、纯化骨髓间充质干细胞的方法有：全骨髓法、密度梯度离心法、免疫学分离法、贴壁筛选法、密度梯度离心与贴壁筛选相结合。现已证明密度梯度离心与贴壁筛选相结合，通过首次换液后频繁更换新鲜培养液和传代时缩短胰蛋白酶消化时间的方法，可得到纯度和分化能力均比对照组高的BMSCs细胞群。骨髓间充质干细胞是自骨髓移植供者骨髓获得，这种方法难免会给供者带来痛苦，同时还可能导致供区并发症。骨髓中的间充质干细胞含量极低，而且增殖与分化能力还受年龄的影响，年龄越大，其增殖分化能力也逐渐下降。这些因素限制了骨髓间充质干细胞的临床应用。 　　1.2 脂肪间充质干细胞(adipos-derived mesenchymal stem cells，ADSCs):前脂肪细胞是脂肪细胞的前体细胞，可向成熟脂肪细胞分化。前脂肪细胞因子1(Pref-1)是一种前脂肪细胞特殊标志的跨膜蛋白，该蛋白随着前脂肪细胞的分化而消失，因此前脂肪细胞因子1是前脂肪细胞的重要标记物[7]。前脂肪细胞的特点在于：能自发地分化成脂肪细胞，不会分化成软骨细胞和成骨细胞等。但是前脂肪细胞在体外传代培养几代后，就失去了分化能力，不能为脂肪工程生成足量脂肪细胞。脂肪间充质干细胞是一种存在于脂肪组织的间充质干细胞，具有自我更新和多向分化的潜能，可分化成成脂细胞、成骨细胞、软骨细胞、生肌细胞、内皮细胞[8]、肝细胞和神经细胞谱系。脂肪干细胞可以在任何白色脂肪组织中找到，包括皮下脂肪和网膜脂肪。通过脂肪抽吸术或脂肪切除术可获得大量的脂肪干细胞群。在脂肪组织中，每克组织含5000个间充质干细胞；常规脂肪抽取液300ml可获得在1×107和6×108之间不等的干细胞，并且90%以上的细胞具有活力，因此脂肪组织具有高密度的干细胞[9]。干细胞可通过胶原酶消化、反复过滤、离心而获得SVF，然后传代纯化。取材需考虑性别、年龄、取材位置，这些因素会影响细胞的内分泌功能，从而影响到干细胞的增殖和分化[10]。与BMSCs相比，ADSCs在成脂分化培养下生长更快，活力更强[11]；而且培养时出现衰老的时间更晚。目前ADSCs的特异性表面标记物尚不明确，只了解到脂肪间充质干细胞表达CD13、CD29、CD44、CD49e、CD54、CD55、CD63、CD73、CD90、CD105、CD144、CD146、CD166，它不表达CD11b、CD14、CD19、CD31、CD34、CD45、STRO-1、CD3、CD117、CD62L、CD95L [12-13]。 　　1.3 脐带间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchym al stem cells，hUCMSCs):hUCMSCs是存在于华氏胶中的一种具有自我更新、增殖和多向分化潜能的成纤维细胞样细胞。它与ADSCs、BMSCs和ESCs相比，具有以下优势：来源丰富，成本低，不涉及伦理问题，不会给捐献者带来伤害，表达胚胎干细胞某些特异标志等。hUCMSCs分离方法主要有：酶消化法、组织块贴壁法。在酶消化法中，由于脐带是富含葡萄糖胺和胶原的组织，故多用透明质酸酶和胶原酶消化以获得hUCMSCs[14]。hUCMSCs在体外被证