叉头状转录因子O1对糖尿病肾病小鼠足细胞上皮间质转分化的影响及机制研究-内科学(内分泌代谢病)专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 摘 摘 要 叉头状转录因子 O1 对糖尿病肾病小鼠足细胞上皮间质转分 化的影响及机制研究 研究生：杜萌萌 导 师：秦贵军 教授 郑州大学第一附属医院 内分泌科 郑州 450052 摘 要 背 景 糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)是常见的糖尿病微血管并发症之一，其 常见的临床特征为进行性蛋白尿，肾脏足细胞损伤是引起蛋白尿的关键靶点。 足细胞位于肾小球毛细血管外的基底膜外层。以往研究表明，足突分离和足细 胞凋亡导致蛋白尿，但是，近期有研究发现，蛋白尿发生明显早于足细胞脱落 凋亡。Liu 等提出，在损伤早期，足细胞可经历上皮间质转分化（ epithelia mesenchymal transition，EMT），使足细胞具有运动性，而从基底膜脱落，使滤 过屏障受到破坏。Sam 认为，足细胞经历 EMT 为一动态过程，从中阻断其介导 通路可逆转足细胞 EMT，及时终止足细胞损伤，从而为早期防治蛋白尿的发生， 缓解糖尿病肾病进程提供新的方向。 叉头状转录因子 O1(Forkhead transcription factor O1，FoxO1）在转录翻译、 抗氧化应激、糖脂代谢等方面发挥重要作用。本课题组前期研究发现，上调 DN 大鼠肾皮质 FoxO1，可缓解肾小球病变，包括系膜细胞和足细胞损伤。高糖环 境下，TGF-β/Smad 信号通路激活，介导足细胞发生 EMT，表现为上皮细胞标志 性蛋白 nephrin 表达降低，而间质细胞标志蛋白 desmin 表达升高，肾小球滤过屏 障完整性受到破坏，进而出现蛋白尿，促进糖尿病肾病的发展。有研究发现， 在肾小管上皮细胞中，TGF-β/Smad/ILK 激活促进小管上皮细胞发生 EMT。本课 题组研究发现，肾小球系膜细胞中上调 FoxO1，可抑制 TGF-β 通路，减少高糖 状态下系膜细胞过度合成细胞外基质。然而，在不同细胞中，FoxO1 对 TGF-β I 通路的影响因细胞种类而异。因此，本研究推测，在小鼠足细胞中，FoxO1 可 能通过抑制 TGF-β/Smad/ILK 信号通路过度激活，减轻高糖诱导的足细胞 EMT， 从而缓解糖尿病肾病肾脏足细胞损伤。 目 的 研究 FoxO1 对 糖 尿 病 肾 病 小 鼠 和 高 糖 下 足 细 胞 上 皮 间 质 转 分 化 及 TGF-β/Smad/ILK 传导通路的影响，并对其机制进行探讨。 方 法 使用慢病毒转染的方法，将组成性激活突变型（Constitutively active，CA） FoxO1 慢 病 毒 载 体 （ LV-CA-FoxO1 ）、 FoxO1 短 发 夹 样 RNA 慢 病 毒 载 体 （LV-FoxO1-shRNA）及空慢病毒载体（LV-NC）转染入足细胞，并使用药物干 预 TGF-β 通路。细胞实验分组为正常糖浓度组（NG 组）和单纯高糖（25mmol/L） 组（HG 组），将转染 LV-CA-FoxO1 和 LV-NC 的足细胞培养于高糖（25mmol/L） 环境下分为 LV-CA-FoxO1 组（CA 组）和空病毒载体组（NC 组），将转染 LV-FoxO1-shRNA 的足细胞分为 LV-FoxO1-shRNA 组（shRNA 组）和分别使用 药物 SIS3 及 QLT0267 处理后分为 SIS3 组和 QLT 组。各组分别高糖处理 72h、 药物处理 12h 后，实时荧光定量 PCR（Real-time PCR）检测各组 FoxO1、TGF-β1、 Smad3、ILK、nephrin、desmin mRNA 的表达水平；Western blotting 法检测 FoxO1、 磷酸化 FoxO1（p-FoxO1）、T