第三章-细胞工程PPT.pptVIP

第三章 细胞工程;植物细胞工程： 植物组织培养； 植物细胞培养； 植物原生质体制备与融合； 人工种子 动物细胞工程： 细胞/组织培养； 细胞融合； 单克隆抗体； 细胞核移植、动物克隆； 染色体转移； 干细胞技术 微生物细胞工程;细胞培养;美国时代杂志展望未来最热门的医药生物领域如下;细胞工程基本技术： (1)无菌操作技术： (2)细胞培养技术： (3)细胞融合技术： ;A.培养基 碳源、 氮源、无机物、维生素 B.生长调节剂 生长素： 吲哚乙酸( IAA)、α-萘乙酸(α- NAA)、2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D) 细胞分裂 细胞分裂素： 激动素、6-BA、玉米素等 细胞生长。 ;培养基的固化剂： 琼脂：90%D-半乳糖与10%L-半乳糖的聚糖； 海藻酸钠：L-葡糖醛酸高聚物的钠盐； ; (1) 预备合适的外植体 (2) 除菌 (3) 选用适宜的培养基 (4) 外植体去分化 (5) 继代增殖 (6) 形成胚状体 (7) 炼苗;;初级代谢物：核酸、核苷、核苷酸、氨基酸、蛋白质、糖类； 次级代谢物：代谢产生的无明确的生理功能的与生命无关的成分。生物碱、黄酮、萜类、有机酸，etc. 植物培养细胞的生长阶段： 延迟期：细胞分裂初始期至最大生长期； 对数期：最大生长期，最佳DNA和蛋白质累积率；细胞数增加； 稳定期：细胞重量增加；蛋白质合成停止； 衰退期：细胞高度分化；次级代谢物累积。;A.悬浮培养系统： 细胞并不以单一细胞悬浮生长，而多以非均相集合体的细胞团形式存在(原因是：细胞分裂后未分离、粘多糖的分泌形成粘性表面)。 (1)小规模悬浮培养： 静止培养： 振荡培养：; (2)大规模培养系统： ①成批培养法： ; B. 固定化细胞培养系统： 先通过悬浮培养获得足够细胞数，再将其包埋于惰性支持物内部或贴于表面，放入培养液中培养或连续流入新鲜培养液进行连续培养。 优点： 有利于细胞的分化； 便于细胞团间形成化学物质/物理因素梯度。; (1)平床培养系统：;细胞融合目的：获得双亲本优良性状的杂种生物。 原生质体：细胞除去细胞壁后的剩余部分。 原生质球(球状体)：残存少量细胞壁的原生质体。; a 取材：选取生长活跃的组织/器官。 b 除菌： c 酶解细胞壁：纤维素酶、果胶酶、蜗牛酶 d 分离：过滤、低速离心、比重漂浮法。 e 用新渗透压稳定剂或培养液洗涤。 f 鉴定： 形态观察：直接显微镜观察、荧光增白剂染色、台盼蓝活细胞染色、胞质环流观察； 原生质体活力检测：光合作用、呼吸作用。; (2)原生质体的融合 a 化学诱导直接融合：PEG结合高钙高pH诱导法： 将双亲原生质体与30%PEG混匀，静置，滴加高钙高pH溶液，使均匀并静置，以培养液洗涤，离心得细胞团。 方法特点：对细胞有一定毒性，因此融合时间的控制很重要；丙酸钙较氯化钙产生较高的融合率。 ; b 物理诱导直接融合：微电极法　　　 c 不对称融合法：对一方原生质体适当处理后再与另一方融合。 ;天然种子：由胚珠受精发育而来。 (1)种皮：源于珠被； (2)胚乳：极核受精发育而成，营养组织； (3)胚：胚根、胚茎、胚芽、子叶。 人工种子： (1)人工种皮：海藻酸钠 (2)人工胚乳：营养与生长调节因子. (3)胚状体：由外植体经培养形成。;胚状体的制备： ①外植体经过培养，得多个胚状体(它们处于