第四章 卫生微生物研究和检测的PPT.ppt

样品的处理 损伤菌的复苏 选择性增菌与分离 定量计数方法 混匀样品（非常重要） 液体：电动混匀、手摇混匀、敲打混匀 固体：搅碎混匀、研磨混匀、匀浆混匀 样品浓缩（提高检出率） 沉淀法 过滤法 吸附沉淀法 一、样品的处理 （1）沉淀法：细菌可通过普通离心机离心沉淀而浓缩，或者通过差速离心，去除杂质，收集菌体，达到浓缩的目的。病毒浓缩需采用高速或超速离心机。 （2）过滤法：是将样品在负压或正压作用下，通过孔径为0.45μm的滤膜，细菌被阻留在膜上，而达到浓缩的目的。样品中的病毒可通过膜的静电吸附浓缩。过滤法不但可浓缩微生物，还可消除样品中的抑制剂对后续培养的影响。 二、损伤菌的复苏 较低的培养温度 无选择压力的培养环境 三、选择性增菌与分离 检品中的微生物有哪些？ 检测的困难：微生物小、少、是混合的。 方法：让微生物繁殖，一个变成一大群，再把每一种分开，让它们分别显示出各自的特性，从而得到鉴定。 选择性：采用抑制杂菌的条件，使待检菌生长的更好，利于分离。 物理方法：厌氧条件培养厌氧菌、光照条件培养藻类等 化学方法：根据微生物的营养需求，加入特制的促进或抑制生长的物质 选择性培养基 Selective Media EMB (Eosin Methylene Blue) dyes inhibit Gram (+) bacteria selects for Gram (-) bacteria G.I. Tract infections caused by Gram (-) bacteria 四、定量计数法 检品中的微生物有多少？ 计数 直接（显微镜下计数、比浊法） 间接 （使菌繁殖） 倾注平板法 表面涂布法 MPN法 微菌落快速计数法 “单个菌” “菌落”而计数 统计学方法 显微镜下计数微小菌落 倾注平板法 方法：使样品（1ml）均匀地分布到琼脂培养基中，培养后，计数菌落。 怎样使样品均匀地分布到琼脂培养基中去？ 琼脂的特性：凝固的琼脂要在100 ℃以上才能融化，但融化后的琼脂要在45 ℃以下才会凝固。 微生物：大多数在45 ℃时不会立即烫死。 做法：融化后的琼脂培养基冷却到45 ℃时，加入样品混匀。 加入多少样品才合适？ 使一个平板上生长的菌落数在30~300之间时，最利于计数。 例如：食品中菌落总数的测定 第三章 环境中微生物的主要类群 原核细胞型微生物 真核细胞型微生物 非细胞型微生物 原核细胞型微生物 细菌（致病菌、条件致病菌，非致病菌） 放线菌 鞘细菌 滑动细菌 蓝细菌 真核细胞型微生物 真菌 藻类 原生动物 真菌 酵母菌 霉菌 第四章 卫生微生物研究和检测的方法 卫生微生物检测的特点和基本原则 卫生指示微生物 卫生微生物研究和检测的方法 一、样品的采集原则 （一）样品必须要有代表性: 采样量：满足检测要求 采样部位：均匀采样 采样时间：便于分析微生物的动态变化 采样批号：尽量检测每个批号 （二）避免对样品的污染 器材灭菌、无菌操作 （三）避免对样品中微生物的杀灭和抑制 避免有毒物质的残留和高温影响 （四）对样品进行详细的标记 这是基本要求 肉类 生肉：取屠宰后两腿内侧肌或背最长肌100g/只 熟肉：酱卤制品，熏肉及灌肠取样应不少于200g，烧烤制品应取样50cm2 熟禽：每份样品1只 肉松：每份样品200g 香肚：每份样品1个 要在容器的不同部位采取 清凉饮料 形成批次的产品数 试样数量 8000个以下 2个 8000个以上，22000个以下 3个 22000个以上 5个 盒装鱼肉火腿、灌肠 形成批次的产品数 试样数量 500个以下 2个 501个以上，800个以下 3个 801个以上，1300个以下 5个 1301个以上，3200个以下 7个 ……. …… 二、样品的运送原则 尽快送检： 一般3-4h内送检，减少细菌死亡和进一步繁殖带来的影响。 注意保护待检的微生物： 一定的温度 加保护剂 运送培养基，如病毒、厌氧菌等 根据生物安全规定，妥善包装待运输的标本 进行完善的样品交接 必须有样品送检单，与实验室人员逐项核对后交接 三、实验室检验原则 具有相应的实验室硬件设施： 1级（P4实验室）：可检验危害性最严重的病原体，如天花病毒、HIV、SARS病毒等。 2级（P3实验室）：可检验特殊危险致病菌，如霍乱菌。 3级（P2实验室）：检验一般致病菌。 4级（P1实验室）：检验非致病菌。 具有合格的人员和标准检验方法 人员要有资质，并经常接受培训 采用国家标准方法或公认方法（WHO、EPA等） 加强实验室质量控制 仪器、设备、试剂：定期检定和校准 注意记录和核查：如GLP实验室 报告规范：数据规范，完整签名盖章 实验室应有应急措施 应对突发事件能力 需做多种