刘大卫CrisprCas3.7技术新突破解读.pptVIP

通过SpCas9或xCas93.7在具有基因组整合的GFP报道基因的HEK293GFP人胚肾细胞细胞中的基因组DNA切割。5天后，通过流式细胞仪分析细胞的GFP荧光损失 * * * * * 单碱基编辑的适用范围也大大增加 * * 脱靶效应考察 * * Summary 人类基因组编辑技术的发展日新月异，新的方法和工具层出不穷。新发现的xCas9 3.7活性、保真性、PAM序列灵活性三者同时表现优秀，使xCas9 3.7（由SpCas9进化而来）的出现犹如利刃出鞘，将会极大地促进基因组编辑领域的进程。 PACE噬菌体辅助连续进化器是一个高效的变异体发生筛选体系，这也是Cas酶筛选的一大利器。 长江后浪推前浪，浮事新人换旧人，虽然xCas9 3.7的发现将让人类具有更加“锋利”和“通用性更强”的基因组编辑剪刀，但是它可能仍然无法做到基因组工具中“一统天下”，新的工具仍然需要研发和优化，未来的人类生活一定是更加光明！ * * * * * * * * * * * * * 在PAM识别中具有关键作 * * 该PAM耗竭测定显示xCas9-3.0-xCas9-3.3和xCas9-3.5-xCas9-3.9用NG，NNG，GAA，GAT和CAA PAM切割DNA位点。与起始文库相比，PAM消耗得分最高的克隆xCas9-3.7消耗了NG，NNG，GAA，GAT和CAA PAM至少100倍，并且xCas9-3.6显示第二高的平均PAM消耗得分。 * 细菌中PACE过程中突变是否与哺乳动物细胞中的xCas9功能相容，研究者决定对xCas9的真本事在人细胞中做一下测试 a，通过dSPCas9-VPR和dxCas9（3.7）-VPR转录激活靶向在HEK293T细胞中含有相同原型但不同PAM位点的GFP报告质粒。 * Evolved Cas9 variants with broad PAM compatibility and high DNA specificity * Speaker: Wan Lin Wang Date：05.02.2018 Hu J H, Miller S M, Geurts M H, et al. Evolved Cas9 variants with broad PAM compatibility and high DNA specificity.[J]. Nature, 2018. 1994 B.A. in chemistry from Harvard . worked in the synthetic chemistry laboratory of Nobel Laureate E.J.Corey. 1999 Ph.D. from UC Berkeley . assistant professor of chemistry and chemical biology at Harvard 2005 Howard Hughes Medical Investigator. 2005-2018 MITs Broad Institute NSF CAREER award (2001), Alfred P. Sloan Foundation Research Fellow (2002) American Chemical Society Pure Chemistry Award (2006), the American Chemical Society Arthur C. Cope Young Scholar Award, the Ronald Breslow Award for Achievement in Biomimetic Chemistry * Introduction David R. Liu E.J.Corey科里 DNA-templated organic synthesis (DTS), a technique to translate DNA sequences into synthetic small molecules, rather than proteins, and applied DTS to the discovery of bioactive small molecules and new chemical reactions. phage-assisted 噬菌体辅助continuous evolution (PACE), a technique that uses the short 10-minute lifespan of the M13 bacteriophage to achieve the ra