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真菌毒素检测中免疫胶体金技术应用价值分析 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)10－0248－01 　　【摘要】目的：通过实验分析免疫胶体金技术在真菌毒素检测中的应用价值。方法：使用两个相同规格的干净且干燥的烧杯，采集两份同等重量的样品。标号后使用两种不同的标记方法检测其中两份的黄曲霉毒素B1，检测结果相对比，并比较两种方法的测定范围、灵敏度、分析时间等等指标。并记胶体金技术为实验组，另一种方法为对照组。结果：两种方法均测出了这种真菌毒素的含量，但是使用胶体金技术成本低廉、操作简易、容易识别、灵敏度高。结论：免疫胶体金技术在真菌检测中具有很高的应用价值，应该更多的应用到真菌检测中，代替以往的效率低成本高的检测方法。 　　【关键词】真菌毒素；免疫胶体金技术；应用价值 　　 免疫胶体金技术自1857年由法拉利发现以来，经过了半世纪的发展和完善，已能够广泛应用于临床免疫印迹、快速斑点渗滤技术、电镜光镜肉眼下、免疫层析、分子生物学等等方面。胶体金技术是一种发展不久的新型的的固相免疫标记技术。是以胶体金作为失踪标记物应用于特异性抗原抗体反应。相较于较早发展起来的荧光素标记、放射性同位素标记、和酶标记方法。胶体金廉价，容易制备；因其本身带有颜色，所以在在电镜、光镜、肉眼下均可应用且容易识别；具有高灵敏度和特异性；胶体金的颗粒大小均匀可控制，因此可进行双重或多重标记??［1］?。 　　 而近年来，真菌毒素对水质、食品、饲料的感染已成为全球性的难点热点问题。常见的真菌毒素如黄曲霉毒素，具有很强的毒性和致癌性，是目前全球范围内最强的致癌物质之一??［2］?。这种毒素还耐热，加热到280℃才发生裂解而被破坏，因此普通的加工制作方法根本不能将其完全清除。所以说真菌毒素的检测是一项艰巨又重要的工作，这就需要人们探索一种高效廉价的检测方法。本文以黄曲霉毒素B1（AFB1）为例，以酶联免疫吸附法作对照，研究免疫胶体金技术在真菌毒素检测中的应用价值。? 　　1 原理 　　 酶联免疫吸附法是通过抗黄曲霉毒素抗体与酶标抗原、待测抗原的???争免疫反应以及酶的催化显色反应相结合，来检测黄曲霉毒素的含量；。胶体金标记技术实质上就是蛋白质分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程，由于胶体金颗粒本身呈红色，所以当免疫胶体金颗粒遇到相应的抗原或抗体时会发生反应产生聚集，在适宜条件下达到一定的密度，出现肉眼可见的红色??［3］?，黄曲霉毒素B1 (AFB1)首先与胶体金颗粒表面的抗AFB1 单克隆抗体反应，如果样品中AFB1 的含量超过限值，胶体金的抗体位点将不再有剩余，当胶体金颗粒层析经过检测线时,胶体金颗粒将不会停留在该线的所在位置，继续上行时与质控线上喷涂的羊抗鼠IgG反应，呈现出胶体金的红色条带。? 　　2 材料与方法 　　2.1 标号分组：1号使用酶联免疫吸附法（ELISA、酶标记法）设为对照组，2号用金标免疫层析法（GICA、免疫胶体金技术）设为实验组。 　　2.2 准备工作（1）材料准备：从山东、福建、天津、上海、湖南省市中，挑选各大超市中的大米，并混匀粉碎。称取5. 0g 大米样品（粉碎后）于100mL 具塞三角瓶中，准确加入25. 0mL 甲醇水(1：1) 溶液振摇15min ，过滤，弃去1/ 4 初滤液，收集样品滤液。用PBS 溶液稀释样品滤液，使最终样品待测液中的甲醇含量为10 %～15 %；样品液的PH保持在6-8之间，PH过高或过高都会影响酶的活性，尤其当PH低于5时，酶会发生不可逆的失活。（2）试剂准备：标准曲线工作液（50.0ng/mL）；按1∶9的比例配制10 倍浓缩样品平衡液（3.7）和超纯水；抗AFB1 单克隆抗体：由中国疾病预防控制中心营养和食品安全所提供；人工抗原(黄曲霉毒素B1 - 卵清白蛋白) ；羊抗鼠IgG，上海华美生物工程公司；AFB1标准品，Sig--ma公司；0. 01M PbS 溶液(pH7. 4)：3g Na2HPO4 #8226;12H20 ，0. 25g NaH2PO4 #8226;2H20 ，8. 7g NaC1 ，蒸馏水定容至1000mL 。（3）胶体金试纸条的准备：配制胶体金--抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体结合物原液2mL ，稀释成选好的最佳浓度14mL ，混均后配成工作浓度；放入10mm ×300mm玻璃纤维素膜，浸泡10～20min ，37 ℃烘干，4 ℃～8 ℃保存备用，粘贴在背衬一端的注样区作为金标垫。在背衬中间检测区粘贴硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜上喷涂浓度为1mg/ mL 黄曲霉毒素B1--牛血清白蛋白作检测线，喷涂2mg/ mL羊抗鼠IgG作质控线，再用1%牛血清白蛋白封闭硝酸纤维素膜，在背衬另一端吸水区粘贴吸水纸作为样品吸收