液相微萃取在中药黄酮类成分分析及其与蛋白结合参数测定中的应用-application of liquid-phase microextraction in the analysis of flavonoids in traditional chinese medicine and determination of its binding parameters with protein.docxVIP

前言中药凭借其副作用小，治病治本，经济实惠的独特优点越来越受到人们的喜爱。但 中药中化学成分十分复杂，单味药本身就是复杂混合物，复方中的化学成分就更加复杂； 中药中大多成分含量极低，加以提取过程中有些化学成分相互作用，使其含量发生很大变 化，这就给中药检测手段的选择与质量标准的制定带来很大的困难。此外，中药分析一般 要通过样品制备（提取、纯化、浓缩）和分析检测（鉴别、检查、含量测定）等步骤完成。 目前中药样品的前处理技术远远不能适应分析测定技术的发展，成为制约中药分析现代化 的―瓶颈‖之一。所以寻找一种能最大限度地保留欲测定成分，较完全地除去非测定成分、 快速、简单、自动化程度高、环境友好、适应检测技术要求的中药样品分离、纯化和浓缩 技术就成为中药分析和质量控制的必需和关键。目前，样品分离、纯化、浓缩前处理方法多达几十种，常用的也有十几种。在中药分析 中用的较多的有：蒸馏法、液-液萃取法、盐析法、固相萃取法，近年来发展起来的还有超 临界流体萃取法、微波助溶萃取法、高速逆流色谱法和固相微萃取法等，这些方法有的手工 操作繁琐，劳动强度大，时间周期长；有的需要特殊仪器，价格较贵，操作复杂；有的甚至 需要使用大量有机溶剂，不但对操作人员的健康有影响，还会造成资源浪费及环境污染。液相微萃取（liquid-phase microextraction, LPME）是由 Jeannot 和 Cantwell 在 1996 年提 出的，因其萃取效率高、消耗有机溶剂少、适用范围广、快速、灵敏等，引起了众多研究 者的关注。近几年该技术已经被成功应用于环境样品、食品农药残留、生物样品和中药样 品中药物成分分离、纯化和浓缩中。由于液相微萃取技术日渐成熟，研究者正在将液相微 萃取技术应用于药物成分与生物大分子间相互作用的研究工作中，并且取得了一定的成 效。本文主要研究了（1）运用漂浮有机液滴凝固液相微萃取（solidification of floating organic drop liquid-phase microextraction, SFODLPME）和中空纤维液相微萃取 (hollow fiber liquid phase microextraction, HFLPME) 两种微萃取模式，对中药黄酮类化合物二氢杨梅素 (dihydromyricetin) 、杨梅素（ myricetin ）、 漆 黄 素 (fisetin) 、槲皮素 (quercetin) 、柚皮素 (naringenin)、山柰素(kaempferide)、异鼠李素(isorhamnetin)和白杨素(chrysin) 的微萃取行 为进行了研究，建立了LPME-HPLC快速测定中药材样品中低丰度黄酮类化学成分含量的方 法。（2）揭示黄酮类化合物富集倍数与浓度之间的关系，对富集倍数EF1μg/mL进行了定义， 并阐述了其物理意义；推导了黄酮类化合物富集倍数与供相体积之间的关系，计算了漂浮有机液滴凝固相体积及黄酮类化合物的表 观分配系数 。（ 3 ） 比 较 了 2p-HFLPME 和 3p-HFLPME的的可操控性、萃取时间、净化和富集效果、准确度及其在中药材中低丰度黄 酮类化学成分含量测定中的异同。（4）利用HFLPME同时、快速测定了6种黄酮类化合物与 牛血清白蛋白的结合参数；分析了黄酮类化合物同时存在时对蛋白结合的竞争作用；讨论I了黄酮类化合物蛋白结合率的浓度依赖性。本论文研究证明LPME是一种简单、可靠、快速、有效的样品前处理技术，LPME技术 在对中药复杂样品低丰度微量或痕量成分的分离、提取、浓缩和净化中有着广泛的应用空 间和前景。同时也为研究药物与生物大分子相互作用提供了新的方法和途径，拓展了中药 研究的技术手段。HOOOHOHOOHOHHOOHOOHOHOHOHOHOHO OH OOHOH O杨梅素二氢杨梅素漆黄素HOOOHOHO槲皮素OHHO OHOOHO柚皮素OHHOOOHOHOHO山奈素HOOOCH3HOOOHOHOHOOHO异鼠李素白杨素图 1 8 种黄酮类化合物结构式Fig. 1 Chemical structures of eight flavonoids compoundsII学位论文独创性声明本人声明，所呈交的学位论文系在导师指导下本人独立完成的研究成果。文中任 何引用他人的成果，均已做出明确标注或得到许可。论文内容未包含法律意义上已属 于他人的任何形式的研究成果，也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与 我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢 意。本文如违反上述声明，愿意承担以下责任和后果：1、交回学校授予的学位证书；2、学校可在相关媒体上对作者本人的行为进行通报；3、本文按照学校规定的方式，对因不当取得