血小板源性生长因子-d在膀胱癌中表达及其临床意义-expression of platelet-derived growth factor - d in bladder cancer and its clinical significance.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研 究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集 体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中 以明确方式标明。本人完全意识到，本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名： 日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本 人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。必威体育官网网址□ ，在年解密后适用本授权书。本论文属于不必威体育官网网址□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日1绪言膀胱癌（Bladder carcinoma，BC）是临床上常见的恶性肿瘤之一，在我国其 发病率和死亡率均居泌尿系统肿瘤的首位，是一种直接危胁患者生存的疾病。膀 胱癌可以发生于任何年龄阶段，主要发病年龄在中年以后，男性发病率约为女性 的3～4倍，随着年龄增加发病率也呈上升趋势。近年来随着我国老年人口的增加， 膀胱癌的发病率也在逐年增高。膀胱癌最常见的病理类型为膀胱移行细胞癌（Bladder Transitional Cell Carcinoma, BTCC），约占膀胱癌的90%～95% [1]，还 有少数为鳞癌、腺癌等。目前研究认为，膀胱癌的发生是多因素、多步骤、复杂 的病理过程，其生长呈现多中心、浸润性、易复发的重要特性，同时也是术后高 复发率(50%～70%)的原因，严重影响了膀胱癌的治疗效果，降低了患者的生存 率。目前关于膀胱癌的病因、发生发展的机制仍不十分明确，对于这些方面的研 究将有助于找到针对膀胱癌的特异、敏感的治疗药物和方法，从而提高治疗效果、 降低复发率。血小板源性生长因子-D(Platelet-derived growth factor-D，PDGF-D)是2001年 才发现的PDGF家族新成员[2]。目前发现PDGF-D广泛存在于机体多种器官和组织 中，如心脏、肾脏、胰腺、卵巢、膀胱、脂肪组织、胃、睾丸、乳腺等，参与胚 胎的发育和器官的分化成熟，具有促进细胞增殖、迁移、趋化、血管生成、组织 修复等多种生物学活性，因而成为生长因子家族的一个研究热点。目前在肿瘤学 方面的研究发现PDGF-D在前列腺癌、肺癌、卵巢癌、肾癌、胰腺癌等多种恶性 肿瘤中均呈现出过表达，而且过表达的PDGF-D促进了上述这些肿瘤的发生和恶 性进展，并且通过实验推测PDGF-D与其特异性受体相结合后激活了相应的信号 传导途径，从而导致了这些肿瘤的发生和发展 [3]。这些结果均提示PDGF-D与肿 瘤的发生发展密切相关，已经引起了研究人员们的高度关注。但是目前尚未见有 关PDGF-D在膀胱癌方面的报道，为了深入了解PDGF-D在膀胱癌中的表达情况 及其临床意义，我们采用实时定量RT-PCR和Western-blot法检测PDGF-D在膀胱 移行细胞癌及癌旁正常组织中的表达情况，分析其与临床病理特征的相关性，探 讨PDGF-D与膀胱癌发生发展之间的关系及其意义。材料实验材料2材料与方法收集 2007 年 10 月至 2008 年 8 月本院切除的 BTCC 组织标本 62 例，年龄43-68 岁，其中男性 48 例，女性 14 例；年龄60 岁患者 28 例，≥60 岁的患者34 例；按 WHO 标准分级：G1 21 例，G2 25 例，G3 16 例；按 UICC 标准分期：PTis-T1 28 例，PT2-T4 34 例；有淋巴结转移者 20 例，无淋巴结转移者 42 例（表1）。并取 10 例癌旁正常组织作对照。离体 10 分钟内-70°C 冻存。标本均经病 理证实。表 1膀胱移行细胞癌病例标本一般资料指标 性别年龄病理分级 临床分期标本N=62男48女146028≥6034G121G225G316Tis-T128T2-T434无42淋巴结转移有20主要试剂Trizol、逆转录试剂盒、引物购自 Invitrogen 公司；PDGF-D 单克隆抗体购自 Sigma 公司；β-actin、辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔 IgG 购自 Sant Cruz 公司；BCA 试剂盒、ECL 购自 Pierce 公司。2.2 实验方法2.2.1 实时定量RT-PCR （real-time RT-PCR）：采用Trizol试剂盒提取样本总 RNA，运用逆转录试剂盒合成cDNA，按照试剂盒说明书提供的步骤进行操作。 使用Prime5.0设计PDGF-D及内参β-actin引物序列，见表2。