超声辅助提取高效液相色谱法检测小麦籽粒中杀雄嗪酸残留.docVIP

超声辅助提取高效液相色谱法检测小麦籽粒中杀雄嗪酸残留 　　摘 要 建立了高效液相色谱法（HPLC）检测小麦籽粒中化学杂交剂SQ-1主成分杀雄嗪酸残留的方法。以75%乙醇为提取剂，正反萃取净化；采用Diamonsil C??18不锈钢柱，以甲醇-0.5% （NH4）?2HPO4溶液（60∶40，V/V, pH 2.5）为流动相，检测波长283 nm，流速1.0 mL/min。结果表明：化学杂交剂SQ-1主成分杀雄嗪酸在0.75～?25.0 mg/L范围内线性关系良好，相关系数r＝0.9999，在3个添加水平（1.0, 5.0和10.0 mg/kg）范围内，平均加标回收率在84.2%～95.0%之间，相对标准偏差为1.0%～3.3%，检出限为0.075 mg/L。 　　关键词 小麦； 高效液相色谱； 正反萃取； 化学杂交剂SQ-1; 杀雄嗪酸 　　 2011-07-23收稿：2011-09-22接受 　　本文系国家“863”计划重大专项（Nos. 2009AA101102，2011AA10A106）、国家自然科学基金项目（Nos.31171611）、高等学校博士学科点专项科研基金（No. 20090204110024）和陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项（No. 2014ZDKG-08）资助 　　* E-mail：zhanggsh@public.xa.省略 　　1 引 言 　　小麦化学杂交剂诱导的生理型雄性不育，在生产上具有配制组合自由、省时、省力等优点，是目前小麦化控“两系法”杂种优势利用的主要途径[1～4]。SQ-1是我国自行研制的具有自主知识产权的一种新型小麦化学杂交剂，主要化学成分为杀雄嗪酸。它具有杀雄效果彻底、对小麦无任何不良影响和施药期较长等优点，在小麦上经多年大面积制种实践有着很好的杀雄效果，可诱导小麦杀雄率达到95%～100%，异交结实率超过85%，目前已在生产制种中得到广泛应用，使化控二系小麦杂种优势利用率先走向了大面积生产[5～8]。但小麦化学杂交剂喷施后，收获的F?2种子（食用商品粮）中是否存在杀雄嗪酸的残留，对其安全应用十分重要。然而，目前有关本领域研究很少有报道。 　　在农药残留分析中经常使用的检测方法有气相色谱法（GC）[9,10]、高效液相色谱法（HPLC）[11]、气相色谱-质谱法（GC/MS）[12,13]、液相色谱-质谱法（LC/MS）[14]、薄层色谱法（TLC）、超临界流体色谱法（SFC）、毛细管电泳法（CE）[15]和酶联免疫吸附测定法（ELISA）[16,17]等。本研究采用超声波辅助提取，正反萃取净化，高效液相色谱法检测杀雄嗪酸在小麦籽粒中的含量。结果表明，本方法净化效果好，回收效率和灵敏度高，且操作步骤简单，检测成本低，不仅可用于检测化学杂交剂SQ-1主成分杀雄嗪酸残留量，还为小麦化控两系杂种优势利用提供了有力的技术支持。 　　2 实验部分 　　2.1 仪器与试剂 　　高效液相色谱仪（Waters公司），配2487双通道紫外检测器；Diamonsil C??18色谱柱（250 mm×4. 6 mm, 5 　　?SymbolmA@ m）； Electron Evolution 300紫外分光光度计（Thermo公司）；上海亚荣-RE52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；IKA A11 basic分析用研磨机（广州仪科实验技术有限公司）；Milli-Q Biocel超纯水机（美国Milli-poreco公司）；SK-1快速混匀器（常州国华电器）；甲醇（色谱纯）；乙醇、乙腈、乙醚、二甲苯、正己烷、乙酸乙酯、氯仿，杀雄嗪酸标准品由陕西省作物杂种优势研究与利用重点实验室提供。 　　2.2 色谱条件 　　Diamonsil C??18色谱柱（250 mm×4. 6 mm, 5 　　?SymbolmA@ m）；流动相：甲醇-0.5% （NH4）?2HPO4溶液（60∶40，V/V, pH 2.5）；检测波长为283 nm；流速 1 mL/min；柱温30 ℃；进样量 10 　　?SymbolmA@ L。 　　2.3 样品前处理 　　称取匀质化后的小麦样品西杂5号亲本Mp02, Fp02和后代F?2（食用商品粮）2 g于50 mL离心管中，加入10 mL 75% 乙醇，超声提取10 min，然后过滤上清液（提取3次），合并滤液。将滤液旋转蒸发至近干，用超纯水定容至5 mL，调节至pH 2.5，加入乙酸乙酯5 mL，剧烈振荡1 min，静置10 min，待有机相和水相分层后，取有机相，重复上述萃取步骤，合并有机相。在有机相中加入1 0mL NaOH溶液，剧烈振荡1 mi