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超声波辅助法提取凤尾草中黄酮类化合物影响因素研究 　　摘要：采用超声波辅助法提取了凤尾草中的黄酮类化合物，研究了影响凤尾草黄酮类化合物提取的多种因素。试验结果表明，在提取温度为４０℃，提取时间为４０ ｍｉｎ且用60%（体积分数，下同）甲醇作为提取剂时提取率最高。 　　关键词：凤尾草；黄酮类化合物；影响因素 　　中图分类号：Ｒ２８４．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：0439－８114（２０11）09－1878-02 　　 　　Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ 　　Pteris multifida 　　 　　ＷＡＮＧ Ｂｉｎ１，ＸＵ Ｓｈｏｕ－ｘｉａ２ 　　（１． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｕｑｉａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｕｑｉａｎ ２２３８００，Ｊｉａｎ???ｓｕ，Ｃｈｉｎａ； 　　２． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓｕｑｉａｎ Ｈｉｇｈｅｒ Ｎｏｒｍａｌ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｓｕｑｉａｎ ２２３８００，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ） 　　 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ mｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｆｒｏｍ Pteris multifida； ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ． Ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍａｘｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｗａｓ ａｃｈｉｅｖｅｄ ｗｈｅｎ ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｆｏｒ ４０ ｍｉｎ ｕｎｄｅｒ ４０ ℃ ｕｓｉｎｇ 60%（V/V，the same below） ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｓ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｇｅｎｔ． 　　Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Pteris multifida； ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； ｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇ ｆａｃｔｏｒｓ 　　凤尾草，又称鸡爪草，属凤尾蕨科的小型陆生蕨，叶二型；不育叶为一回羽状复叶，羽片条形，上部羽片基部下延，在中轴两侧形成狭翅，下部羽片常有二至三叉，形似凤尾，故而得名［１］。凤尾草中全草含黄酮类、甾醇、氨基酸、内酯或酯类等生理活性成分，全草都可以供药用，它具有清热利湿、凉血解毒、强筋活络等功效［２］，能增强免疫力、延缓衰老等，无论在临床应用还是保健类食品开发方面都有广阔的开发前景。因此对凤尾草的研究和开发成为国内外目前的研究热点之一［３－５］。本试验从凤尾草黄酮类化合物提取影响因素方面进行了研究，为凤尾草的深入研究和天然药物的开发提供了一定的理论依据。 　　１材料与方法 　　１．１材料 　　凤尾草：采摘于江苏省宿迁学院院内墙角下。 　　１．２主要试剂和仪器 　　0.01 mol/L盐酸、60%甲醇、60%（体积分数，下同）乙醇、60%（体积分数，下同）丙酮，均为分析纯，纯品由国药集团化学试剂有限公司（上海）生产；芦丁标准品，由中国药品生物制品检定所提供。 　　ＵＶ－２１０２Ｃ型紫外－可见分光光度计［尤尼柯（上海）仪器有限公司］；ＦＡ２００４Ｎ电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；ＫＱ－２５０Ｂ型超声波清洗器；温控水浴锅；大孔吸附树脂。 　　１．３方法 　　１．３．１黄酮类化合物的提取称取１０.00 ｇ凤尾草样品，研磨破碎后，用60%甲醇按１∶１０（ｍ／Ｖ，ｇ∶ｍＬ）的比例混合均匀，于４０℃下提取60 min后，在４０℃的水浴中超声波辅助提取３次，每次１０ ｍｉｎ，抽滤。收集到的滤液于４０℃下减压浓缩得到红色黏稠的粗提液，经树脂纯化、洗脱后，再次进行减压浓缩即得到黄酮类化合物浓缩液［６］，将浓缩液用0.01 mol/L盐酸和６０％甲醇配成ｐＨ值为３．０的备用液，摇匀供分析试验用。 　　１．３．２黄酮类化合物含量的测定芦丁标准储备液：称取０．０１０ ０ ｇ芦丁标准品，置于５０ ｍＬ的容量瓶中，加0.01 mol/L盐酸和６０％甲醇使其溶解［7，8］，调节ｐＨ值为３．０并稀释至刻度，摇匀备用。分别移取１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５ ｍＬ的芦丁标准储备液，于１０ｍＬ容量瓶中，定容。在波长５２０ ｎｍ处分别测定其吸光度，结果见图１。准确吸取待测凤尾草的提取液２．０ ｍＬ定容至５０ ｍＬ。在波长５２０ ｎｍ处测其吸光度。由标准曲线回归方程计算出凤尾草中黄酮类化合物的浓度，根据稀释倍数计算出凤尾草中黄酮类化合物的总含量［9，10］。 　　 　　２结果与分析 　　２．１凤尾草黄酮类化合物的光谱特性 　　由吸收光谱图２可知，凤尾草黄酮类化合物在