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肺癌组织和肿瘤细胞系中BRG1表达分析 　　摘 要：BRGJ(brahma-related gene 1)是进化上高度保守的SWI／SNF染色质重塑复合物的成员之一，研究表明：BRGI具有抑瘤基因的特征，可能与肿瘤的发生发展有关,我们采用RT―PCR、NortherR杂交和Westemblotting证实：肺腺癌细胞系A549和鼻咽癌细胞系HNE2、HNE3、CNE1中无BRG1的表达，而肺鳞癌细胞系NCI―H520、永生化正常人支气管上皮细胞系HBE和鼻咽癌细胞系HONE1、HNE1、CNE2中有BRGJ的表达，同时，通过RT―PCR检测10例肺癌组织标本，发现60％(6/10)的肺癌组织中日BRG1的mRNA水平明显下调，而配对正常肺组织中BRG1，的mRNA表达未见改变,对29例肺癌组织和10例配对正常肺组织切片进行免疫组化染色，结果显示：肺癌组织中BRG1蛋白表达的阳性率为37.9％(11/29)，配对正常肺组织中BRG1蛋白表达的阳性率为90％(9/10)，两者的差异有显著性(P 　　关键词：BRG1；表达；肺癌；肿瘤细胞系 　　中图分类号：R730 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007―7847(2007)0l-0084―06 　　肺癌是目前全球发病率最高的恶性肿瘤，严重威胁人类的健康和生命,近年来我国肺癌的发病率和死亡率迅速上升，有人预计中国将成为21世纪的肺癌大国，肺癌一般分为4种主要的组织学类型：鳞癌、腺癌、大细胞癌和小细胞癌，前三者统称为非小细胞肺癌(NSCLC)，约占肺癌总数的75％，后者称小细胞肺癌(SCLC)，约占25％，肺癌的发生发展是一个多因素、多步骤的复杂过程，其中瘤基因和抑瘤基因发挥着至关重要的作用，已有研究显示，肺癌在临床前期就有大约10个分子事件，包括瘤基因myc、K-ras、EGFR、Her-2/neu、Bcl-2的激活与抑瘤基因p53、Rb、FHIT、p16的失活等，但这些基因在多种肿瘤中都普遍存在改变，还不足以完全解释肺癌发生发展的机制，因此有必要继续寻找和鉴定新的肺癌相关基因。 　　Girard等利用399个微卫星标记对肺癌细胞系及组织标本进行全基因组等位基因分析(allelotyping)，发现NSCLC中19p13区域存在高频率的杂合性丢失(LOH)，已知定位于19p13.3的抑瘤基因LKB1/STK11，在约30％-50％有19p LOH的肺腺癌中失活，但定位于该区域的其他基因仍可能是肺癌的候选抑瘤基因，因为LKB1/STK11的突变目前只发现于肺腺癌中，而占NSCLC大多数的鳞癌中并未检测到LKB1/STK11的突变。 　　BRGl是1993年Khavari等利用果蝇的Brm(Brahma)DNA片段为探针，筛选Hela细胞cDNA文库而分离得到的一个人类基因，属于进化上高度保守的SWI/SNF染色质重塑复合物的成员之一，它由35个外显子和34个内含子组成，其转录本的大小约为5kh.BRG1蛋白由1613个氨基酸组成，共有4个结构域：I脯氨酸富集区、Ⅱ电荷富集区、Ⅲ依赖DNA的ATP酶区、IV溴化区，其相对分子质量为205kD，是一种磷酸化核蛋白，主要以ATP依赖的方式通过破坏组氨酸一DNA的接触而调节基因的表达，通过放射杂交图谱分析，已将BRGl定位于19p13， 　　大量研究表明：将BRGl重新导入到其缺陷的肿瘤细胞系中，可阻滞细胞生长并逆转细胞的转化表型；BRGl及SWI/SNF复合物的其他成员，能与Rb1、p53、BRCA1、LKB1/STK11等抑瘤基因产物相互作用，参与细胞生长和分化的调节，另外，转基因动物实验也证实：BRGl纯合子突变(Brgl-/-)小鼠因不能发育而致死；BRGl杂合子突变(Brgl+/-)小鼠虽发育正常，但较BRGl野生型(Brgl+/+)小鼠容易发生肿瘤，这说明BRGl具有抑瘤基因的特征，可能与肿瘤的发生发展有关。 　　目前，国外关于肺癌中BRGl的研究较少，国内则未见报道，从已有的研究得知：BRG1蛋白在至少10％-30％的NSCLC组织和细胞系中表达下调或缺失，且这些BRGI蛋白表达缺失的NSCLC病例预后较差，但BRG1在我国肺癌患者中的表达情况及其mRNA和蛋白质表达的相关性仍不清楚，为此，我们从mRNA和蛋白质两个水平对肺癌组织和细胞系进行BRG1表达分析，旨在阐明BRG1表达与肺癌发病的关系。 　　 　　1 材料与方法 　　 　　1.1 细胞、组织与质粒 　　永生化人支气管上皮细胞系HBE，肺鳞癌细胞系NCI.H520，肺腺癌细胞系A549，鼻咽癌细胞系CNE1、CNE2、HNE1、HNE2、HNE3、HONE1，大肠腺癌细胞系SW480、HT-29，宫颈癌细胞系HeLa，喉癌细胞系HEp-