il23th17细胞在eae中作用的探讨-study on the role of il 23 th 17 cells in eae.docx

目录中文摘要4英文摘要6缩略词简表8一.前言9二.材料与方法12三.结果24四.讨论31五.结论37参考文献38综述41致谢53IL-23/Th17 细胞在 EAE 中作用的初步探讨摘要目的: 建立慢性-非缓解性 EAE 的小鼠模型，运用 ELISA、RT-PCR、流式细 胞术等方法在 mRNA 和蛋白水平检测 IL-23/Th17 及其相关细胞因子 IL-17 在小 鼠脑及脾组织中不同时期的表达情况，以探讨 IL-23/Th17 在多发性硬化（MS） 中发病的免疫学机制。方法：将 45 只 8 到 12 周清洁级健康雌性 C57BL/6 小鼠，随机分为佐剂对照 组（n=21 只）和 EAE 组（n=24 只）。EAE 组中根据疾病的发展阶段又分为发病 初期、发病高峰期、慢性期组。EAE 组用完全弗氏佐剂和人工合成的 MOG35- 55 混合后免疫 C57BL/6 小鼠，佐剂对照组用等量的 PBS 代替 MOG35-55，按照 Bensen[1]评分标准进行评分，运用 ELISA 方法检测各组各时期小鼠的外周血 IL-23、 IL-17 的分泌水平、流式细胞术方法检测脾淋巴细胞 Th17 细胞数量、实 时荧光定量 RT-PCR 技术检测小鼠脑组织中 IL-23P19 亚基的动态表达情况。结果：1.小鼠模型 EAE 组小鼠发病率为 75%（18/24）,最高临床评分 5 分；佐剂对照 组均无发病迹象，临床评分 0。2.ELISA EAE 组小鼠外周血 IL-17 含量与佐剂对照组比较，有显著性差异 (P0.05)，各期均升高，其中高峰期升高明显（P0.05），慢性期有所下降，但 与 高 峰 期 相 比 无统 计 学 差 异（ P0.05 ），佐 剂 对 照 组小 鼠 各 期 之间 无 差 异（P0.05）。IL-23 含量各佐剂对照组之间无差异（P0.05），EAE 组较对照组显 著升高，其中发病初期升高最明显（P0.05）。3.流式细胞术检测 小鼠脾淋巴细胞中 Th17 细胞/淋巴细胞比例佐剂对照组各期 均呈低表达，各期之间差异无统计学意义（P0.05），EAE 组较对照组表达上调， 高峰期升高最明（P0.05）。4.实时荧光定量 RT-PCR 结果显示 EAE 组脑组织中 IL-23P19 含量较佐剂对照组明显升高（P0.05），其中发病初期表达量最高，高峰期表达有所下降（两组相比有统计学意义，P0.05），慢性期表达下降，但较高峰期无明显统计学差异（P0.05）。结论：1.本实验用 MOG35-55 免疫 C57BL/6 小鼠成功诱导出慢性非缓解性 EAE。2.IL-23/Th17 轴在 EAE 疾病的发生发展中起免疫促进作用,且 IL-23 在发病早期 起着关键性的诱导促进作用，Th17 则与疾病的严重程度呈正相关。【关键词】 EAEHelper T–cell type 17 IL-23 IL-23p19Preliminary Study the role IL-23/Th17 cells in the experime ntal autoimmune encephalomyelitisAbstractObjective Establish chronic non-remitting experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model of C57BL/6 mice by myelin oligodendrocyte glycolprotein (MOG), and to detect the mRN A and protein expression levels of IL- 23/Th17 and related cytokines IL-17 in the mouse brain and spleen tissues at different times by using ELISA ,Real- time fluorescence quantitative RT-PCR , flow cytometry. To explore the role of IL-23/Th17 in the immunologic pathogenesis of chronic model of EAE/MS.Methods 45 inbred line adμlt female C57BL/6 mice were randomly divided into adjuvant-control groups and EAE groups，Two groups are divided into onset, peak and chronic phase according to