igf1r在调节血管内皮细胞屏障功能中的作用及机制研究-study on the role and mechanism of igf1r in regulating the barrier function of vascular endothelial cells.docx

目录中文摘要1Abstract5前言10第一部分血管内皮细胞功能障碍在肾间质纤维化中的作用14材料和方法14实验结果22第二部分IGF-1R在血管内皮细胞屏障功能中的作用26材料和方法26实验结果29讨论32全文总结35参考文献36综述41攻读学位期间公开发表论文49攻读学位期间所获奖项50附图51致谢60学位论文独创性声明61学位论文知识产权权属声明61学位论文使用授权声明61中英文对照缩略词表英文缩写英文全称中文全称UUOUnilateralureteralobstruction单侧输尿管梗阻PDGFR-αPlatelet-derivedgrowthfactorreceptor-α血小板源性生长因子受体-αRIFRenalinterstitialfibrosis肾间质纤维化ROSReactiveoxygenspecies活性氧α-SMAα-smoothmuscleactinα-平滑肌肌动蛋白VE-cadherinVascularendothelialcadherin血管内皮钙粘蛋白P-VE-cadherinPhosphorylationVascularendothelialcadherin血管内皮钙粘蛋白磷酸化TNF-αTumornecrosisfactor-α肿瘤坏死因子-αVEGFVascularendothelialgrowthfactor血管内皮生长因子IGF-1RInsulin-likegrowthfactor-1receptor胰岛素样生长因子-1受体IGF-1Insulin-likegrowthfactor-1胰岛素样生长因子-1RNAiRibonucleicacidinterference干扰核糖核酸MCP-1Monocytechemoattractantprotein-1单核细胞趋化因子-1CKDChronickidneydisease慢性肾脏病HUVECsHumanUmbilicalVeinEndothelialcells人脐静脉内皮细胞FITCFluoresceinisothiocyanate异硫氰酸荧光素siRNASmallinterferingRibonucleicacid小干扰核糖核酸vWFVonWillebrandFactor血管性假性血友病因子SDF-1Stromalcell-derivedfactor-1基质细胞衍生因子-1AJsAdherentsjunctions黏附连接TJsTightjunctions紧密连接VCAMVascularcelladhesionmolecule血管细胞粘附分子IGF-1R在调节血管内皮细胞屏障功能中的作用及机制研究专业：内科学（肾脏病学）硕士研究生：王凤导师：梁鸣教授中文摘要研究背景慢性肾脏疾病的发病率和患病率近年来呈逐年上升的趋势，而各种慢性肾脏疾病的最终结局就是肾脏纤维化。血管内皮细胞是存在于血液和肾间质之间具有限制性通透性的结构，对维护肾组织微环境的稳定具有重要意义，但肾脏血管内皮细胞在肾脏炎症反应和纤维化的起始阶段和发展进程中的作用，很大程度上仍然是不完全清楚的。多项研究表明，血管内皮钙粘蛋白(Vascularendothelialcadherin，VE－cadherin)属于Ⅱ型钙粘蛋白，可介导钙依赖的细胞与细胞粘附，胞浆区通过胞内介导蛋白与细胞骨架相连。VE－cadherin的酪氨酸残基磷酸化与内皮细胞的细胞间聚集相关。近年研究发现，血管内皮细胞VE-Cadherin酪氨酸磷酸化是导致血管通透性重要病理机制。胰岛素样生长因子1受体（Insulin-likegrowthfactor-1receptor，IGF-1R）是酪氨酸蛋白激酶受体超家族的一员，参与调节细胞的增殖、分化和生存调控。越来越多的研究表明，IGF-1R在内皮细胞是一种保护因子。在肾脏和视网膜内皮细胞已经发现存在IGF-1/IGF-1R特异性的结合，但是否在慢性肾脏病（Chronickidneydisease，CKD）所致的病理性反应中起作用尚不清楚。此外，IGF-1R在调节细胞间粘附同样起着重要的作用，与细胞连接蛋白的关系也日益受到关注。本研究通过观察IGF-1R对VE-cadherin的影响，探讨IGF-1R对血管内皮细胞通透性的调控作用，并对可能的机制进行深入探讨，为研究肾纤维化的发病机制提供新线索。本研究首先观察了单侧输尿管梗阻（Unilateralureteralobstruction,UUO）模型肾组织中血管内皮细胞损伤与血管内皮细胞通透性的关系，血管内皮细胞1特异性基因敲除IGF-1R后对UUO血管内皮细胞损伤的影响；然后应用RNAi技术，分析了IGF-1R对H2O2刺激的体外培养的血管内皮细胞通透性以及对细胞间重要连接蛋白VE-cadherin磷酸化表达的影响，在此基