igf1对肾小管上皮细胞转分化作用机制的影响-effects of i gf1 on the mechanism of transdifferentiation of renal tubular epithelial cells.docx

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2018-05-29 发布于上海
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igf1对肾小管上皮细胞转分化作用机制的影响-effects of i gf1 on the mechanism of transdifferentiation of renal tubular epithelial cells

目录中文摘要...................................................................................................................1英文摘要...................................................................................................................3常用英文缩略词表..................................................................................................6前言.........................................................................................................................7材料与方法.............................................................................................................12结果.........................................................................................................................21讨论.........................................................................................................................30结论.........................................................................................................................35参考文献.................................................................................................................36综述……………………………………………………………………………….40参考文献…………………………………………………………………………..46致谢………………………………………………………………………………..49IGF-1对肾小管上皮细胞转分化作用机制的影响研究生：林美卿导师：黄国良教授中文摘要目的：探讨PI3K/Akt通路在IGF-1诱导的人肾小管上皮细胞（humankidneyproximaltubularepithelialcellline，HKCs）间质转分化过程中的作用和意义。方法：用含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12（1:1）培养液将HKCs细胞培养于6孔板或培养瓶中，待细胞生长至亚融合状态，吸弃培养基，换成无血清（freeserummedium，FSM）的培养基继续培养24h，然后分成：①正常对照组：用10%FBS的DMEM/F12培养液培养细胞；②IGF-1（50ug/L）组：用50ug/LIGF-1培养细胞；③IGF-1+PI3K/Akt抑制剂LY294002组：用50ug/LIGF-1+15umol/LLY294002培养细胞；按以上分组分别培养24h、48h和72h。免疫印迹法（westernblotting）方法检测a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA）、总Akt（t-Akt）和磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达。再按上述方法将细胞分为：①正常对照组；②IGF-1（50ug/L）组；③IGF-1+不同浓度的LY294002（5、15、20umol/L）组，共同培养48h。倒置相差显微镜观察细胞形态变化；聚合酶链式反应（RT-PCR）方法检测a-SMA和p-AktmRNA表达水平。DAPI染色法检测HKCs细胞凋亡的情况。结果：（1）WB结果显示：随着IGF-1（50ug/L）作用时间的延长，a-SMA蛋白表达上调（p0.05），Akt蛋白表达上调（p0.05），p-Akt蛋白表达上调（p0.05），且作用呈时间依赖性。（2）与IGF-1（50ug/L）单独作用于HKCs细胞相比，IGF-1（50ug/L）和LY294002（15umol/L）共同作用后，a-SMA蛋白表达下