hpa epcam mirna对人胆囊癌细胞抑瘤作用的体内实验研究-inhibitory effect of hpa epc am mirna on human gallbladder carcinoma cells in vivo.docx

HPA、EP-CAM miRNA 对人胆囊癌细胞抑瘤作用的体内实验研究中文摘要目的：观察以脂质体转染 HPA 和 EP-CAM 基因对人胆囊癌细胞株 GBC-SD 体内抑 瘤作用，探讨联合基因治疗胆囊癌的可能性。方法 ： 1. 脂质体 Lipofectamine ? 2000 转染法将 pcDNATM6.2-HPA-DsRed, pcDNATM6.2GW/EmGFPmiR-EPCAM 转 染 人 胆 囊 癌 细 胞 株 GBC-SD 。 应 用 RT-PCR 法检测转染后细胞目的基因的表达。2.选用裸鼠 40 只，随机分为 5 组。于裸鼠腋外侧皮下分别接种原始 GBC-SD细胞组（阴性对照 A 组）、转染空载体的 GBC-SD 细胞组（空白对照 B 组）、干 扰 Hpa 基因的细胞（C 组）、干扰 EP-CAM 基因的细胞（D 组）和共干扰二者的 细胞（E 组），观察裸鼠皮下移植瘤成瘤情况。自皮下接种后第 7d 起，每 3d 用 游标卡尺测量瘤体最长径(a)与最短径(b)，观察肿瘤体积变化，并计算抑瘤率。 3.应用 Western-blot 法检测五组肿瘤组织中 Hpa、EP-CAM 蛋白的表达，与阴性对照组和空白对照组比较差异变化。.采用免疫组织化学法检测各组标本中 Ep-CAM 和 Hpa 的表达情况，进行 对比分析。.统计学处理:所有数据经统计软件 Spss16.0 统计分析。采用了单因素方差分 析（one-way ANOVA）和方差齐性检验，秩和检验，配对样本 t 检验，假设检验 水准为 α=0.05。结果：1.RT-PCR:结果证实 Hpa 和 EP-CAM 分别及共转染基因经筛选后能在GBC-SD 细胞中稳定表达。2.在裸鼠胆囊癌皮下移植瘤模型中，经 Hpa、EP-CAM 转染的胆囊癌细胞成瘤能力较阴性对照及空白对照组降低，C、D、E 组肿瘤生长速度及体积明显低于前 两组（P0.05）,共转染组抑瘤率与单转染组差异有统计学意义（P0.05）。 3.Western-blot 结果显示 C、D、E 组与 A、B 组比较 Hpa、EP-CAM 的蛋白表达面积大小不同,颜色不一。免疫组织化学法检测 C、D、E 各组标本中 Hpa 和EP-CAM 蛋白表达阳性率明显小于 A、B 两组肿瘤组织( P0.05 )。结论：1.胆囊癌细胞中 Hpa、EP-CAM 表达有明显增高。.体内实验证实，沉默 Hpa、EP-CAM 基因可抑制胆囊癌 GBC-SD 细胞裸鼠皮下移植瘤的生长，共同干扰组抑瘤效果更优于单独干扰组，提示联合基因治疗更优 于单个基因。关键词：胆囊癌；Hpa；EP-CAM；RNAi；裸鼠HPA, EP-CAM miRNA inhibitory effect on human gallbladder cancer cells in vivo studyAbstractObjective: To observe the Lipofectamine Heparanase (Hpa) and EP-CAM gene on human gallbladder cancer cell line GBC-SD in vivo antitumor effect, explore the possibility of gallbladder cancer gene therapy.Methods:1.Liposome Lipofectamine?2000 transfection method pcDNATM6.2- HPA-DsRed, pcDNATM6.2GW/EmGFPmiR-EPCAM transfected into human gallbladder carcinoma GBC-SD cells. Application of RT-PCR method to assay gene expression in the cells.2．Used 40 nude mice were randomly divided into 5 groups. Subcutaneously in nudemice were inoculated with the original axillary lateral GBC-SD cells (negative control group A), empty vector transfected cells GBC-SD group (control B), Hpa gene interfere with the cells (C), interference EP -CAM gene in the cell (D) and co-interference between the two ce