hl60细胞裸鼠异种移植瘤差异蛋白质的研究-study on differential protein of hl60 cell xenograft tumor in nude mice.docx

HL-60 细胞裸鼠异种移植瘤差异蛋白质的研究摘要作为血液系统的恶性肿瘤，白血病细胞具有细胞异质性的特点。白血病细 胞株 HL-60 在建株后即以表现出细胞形态上的异质性，培养的 HL-60 细胞表现 出恶性浸润生长的特性。已肯定随着成瘤率提高，高致瘤 HL-60 细胞的各种生 物学特性必然发生改变，但引起改变的内在机制不明，也未见文献报道。蛋白 质组学作为全面分析蛋白质表达变化的有力工具，已广泛应用到疾病特别是肿 瘤研究之中。有鉴于此，我们应用蛋白质组学方法，筛选并鉴定致瘤性不同的 各代 HL-60 细胞间差异表达的蛋白质，探索高致瘤 HL-60 细胞致瘤率提高的机 制，为了解白血病发病机制、病情发展和预后等提供重要价值的研究资料。本实验利用 DIGE 双向电泳技术得到致瘤性不同的四代瘤细胞 HL-60- G1(致瘤率 30%)、HL-60-G2(致瘤率 50%)、HL-60-G3(致瘤率 80%)和 HL-60-G4(致瘤率 100%)与普通型 HL-60 细胞相比蛋白表达的差异，应用 DeCyder 6.5 图像分析软件筛选出显著差异表达的蛋白质（ratio≥1.5，p≤0.01），并使用质谱 技术对差异表达的蛋白进行鉴定，同时根据 Swiss-Prot 库的注释信息对蛋白进 行细胞定位和功能分析。最后对部分蛋白进行 Western blot 及免疫组化验证。本实验共筛选出 87 个差异表达点，其中有 33 个点在高致瘤样本 HL-60-G4 中显著上调，54 个点在高致瘤样本 HL-60-G4 中显著下调。经 MALDI-TOF- TOF 分析，在 33 个上调蛋白点中 26 个点得到鉴定，对应 12 中基因表达产物；在 54 个下调点中，有 39 个点鉴定为 13 种基因表达产物。根据 Swiss-Prot 库的注释信息对鉴定出来的蛋白进行了细胞定位及功能分析，发现上调蛋白点 主要定位于细胞核，而下调蛋白点主要定位于细胞质。同时这些蛋白的功能主 要分为：结合、催化、转录调节、转运等。运用 Western blot 技术及免疫组化 技术分别对两个上调蛋白 T-complex protein submit alpha 和 Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H1 ，两种下调蛋白 Enolase 1 和 Glutathione S- transferase P 进行了验证，结果与 DIGE 结果有较好的一致性。本实验中我们成功的运用蛋白质组学技术初步筛选、鉴定、分析并验证了 多个与致瘤性提高相关的差异表达蛋白，这些上调或下调的蛋白质在致瘤性提 高的发生、发展过程中起到重要的作用。对这些蛋白的深入研究，可能为急性髓系白血病的发生及发展提供重要价值的参考资料。关键词：HL-60 蛋白质组学 DIGE Western blotDifferential protein analysis of HL-60 cell xenograft tumor in nude miceAbstractAs the blood system cancer, leukemia cells have the characteristics of cellular heterogeneity. The HL-60 cells, commonly used human myeloid leukemia cell line, have displayed the character of malignant phenotypes and shown the heterogeneity in cell morphology in cell cultures. What can be sure is, with the increase of emerging rate of tumor, various biological characteristics of high tumorigenicity HL-60 cell must change, but the internal mechanism is unknown, and also not been reported. As a powerful tool of differential expression protein comprehensive analysis, proteomics has been widely applied to diseases, especially cancer research. In view of this, we focused on high tumorigenicity HL-60 cells