hmgb1与tlr2 tlr4在类风湿关节炎中的表达及作用机制研究-expression and mechanism of hm gb1 and tlr 2ttl r4 in rheumatoid arthritis.docx

HMGB1与TLR2、TLR4在类风湿 关节炎中的表达及作用机制研究摘要目 的 ： 探 讨 HMGB1 及 其 配 体 TLR2 、 TLR4在 类 风 湿 关 节 炎 患 者中 的 表 达 ， 评 价HMGB1/TLR通路在类风湿关节炎发病机制中的作用，为寻找治疗RA的新靶点提供依据。方法：1．根据美国风湿病协会ACR1987年RA标准，选取活动期RA患者29例，非活动期RA患者20例及健康对照者18例。2．采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测RA患者及健康对照者外周血单个核细胞（PBMC）HMGB1 mRNA的表达，并进行组间对比研究。 3．采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测RA患者及健康对照者血清中HMGB1的表达，并进行组间对比研究。4．采用免疫荧光流式细胞术（FCM）检测RA患者及健康对照者外周血CD14+单核细 胞表面TLR2、TLR4的表达率和蛋白相对含量，并进行组间对比研究。5．所有受试者常规进行ESR、CRP、RF等其他临床相关指标检测，同时记录患者关节 肿胀数、关节压痛数及关节X线分期等；对血清HMGB1与ESR、CRP、RF、患者关节肿胀 数、压痛数及关节X线分期等进行相关性分析；对血清中HMGB1的表达与单核细胞表面TLR2、TLR4的表达进行相关性分析，结果：1. 活动期RA患者外周血单个核细胞HMGB1mRNA相对表达量高于非活动期RA患者 和健康对照者，差异有统计学意义（P＜0.05），而非活动期RA患者与健康对照者相比无统计学差异；2．活动期RA患者血清HMGB1含量明显高于非活动期RA患者和健康对照者，差异有 统计学意义（P＜0.05），而非活动期RA患者与健康对照者相比无统计学差异；3．活动期RA患者外周血CD14+单核细胞表面TLR2的表达率及蛋白相对含量，均显著高于非活动期RA患者和健康对照者（P＜0.05），而非活动期RA患者与健康对照者间无统 计学差异；4．活动期RA患者外周血CD14+单核细胞表面TLR4的表达率及蛋白相对含量，均显著高于非活动期RA患者及健康对照者（P＜0.05）；非活动期RA患者外周血CD14+单核细胞 表面TLR4的表达率及蛋白相对含量亦显著高于健康对照组（P＜0.05）。5．活动期RA患者血清HMGB1蛋白含量与外周血CD14+单核细胞表面TLR2、TLR4相对蛋白含量表达存在显著正相关（P＜0.05）；亦与ESR、 CRP、RF呈正相关（P＜0.05）， 但与关节肿胀数、关节压痛数、X线分期无关。结论：血清HMGB1蛋白水平可作为评价RA病情活动的指标之一；RA患者中HMGB1及外周血单核细胞表面TLR2、TLR4的表达增高与RA病情发生发展有关；HMGB1/TLR通 路可能是RA发病中炎症信号的重要启动因素。关键词：类风湿关节炎，高迁移率族蛋白1，Toll样受体Study on the expression and mechanism of HMGB1 and TLR2/TLR4 in rheumatoid arthritisAbstractObjective To explore the expressions of HMGB1 and TLR2、TLR4 in the patients with rheumatoid arthritis; and study the role of HMGB1/TLR pathway in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.MethodsAccording to the American College of Rheumatology(ACR)1987 in RA: to select 29 active RA, 20 inactive RA and 18 healthy controls.HMGB1 mRNA was detected by reverse transcription chain reaction(RT-PCR) in PBMC in the patients of RA and healthy controls;The expression of HMGB1 in serum of these cases were detected by ELISA;The expression of TLR2 and TLR4 on CD14+ monocytes in peripheral blood were detected by FCM;All subjects were measured ESR,CRP,RF and other clinical relevant indexes. To analyze the correlation