hiv1单纯及合并hcv感染对hiv1特异性细胞免疫应答影响-effect of hiv - 1 infection alone and in combination with hcv on hiv - 1 specific cellular immune response.docx

广州 广州医学院硕士学位论文 HIV-1 单纯及合并 HCV 感染对 HIV-1 特异性细胞免疫应答的影响 中文 中文摘要 PAGE PAGE 10 PAGE PAGE 13 示特异性 CTL 反应对 HIV-1 感染和 HCV 感染的控制均具有重要作用，国内外也 有少部分关于 HIV-1/HCV 合并感染者的特异性细胞免疫应答的研究报道。但由 于地域和种族的差异，有必要对华南地区 HIV-1/HCV 合并感染者的特异性细胞 免疫应答进行研究。前期我们用 ELISPOT 方法检测 HIV-1 感染者的 CD8+T 细胞 对 HIV-1 合成表位的免疫主导应答发现：HIV-1 Gag 区域肽段诱导产生的 CD8+T 细胞的 IFNγ分泌细胞频率最高。故我们选用 HIV-1 P24 区域（Gag133~191）的 氨基酸序列人工合成的 12 个重叠肽段组成的肽段库作为特异性肽段表位，对 HIV-1/HCV 合并感染者和 HIV-1 感染者的 HIV-1 特异性 CTL 应答进行研究。 实验一 HIV-1 单纯及合并 HCV 感染的 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞及 PBMC 内 IL-7、IL-21、IFN-γmRNA 水平测定 实验对象：以中国华南地区的已 HAART 治疗的 25 例 HIV-1 单纯感染和 22 例 HIV-1/HCV 合并感染者，及 20 例健康对照者为研究对象。 实验方法：分别采用免疫磁珠分选技术、实时荧光定量 PCR 方法，以上述 HIV-1 P24 区域重叠肽段库作为 HIV-1 特异性肽段表位，刺激从上述三组研究对 象的外周血单个核细胞（PBMC）分选出的 CD4+T 淋巴细胞，CD8+T 淋巴细胞， 分别检测 CD4+T 淋巴细胞、CD8+T 淋巴细胞及 PBMC 在刺激前后 IL-7、IL-21、 IFN-γ，β-actin 的 mRNA 水平，统计 IL-7、IL-21、IFN-γ与β-actin 的比值， 并用单因素方差分析方法进行统计分析。 实验结果：已接受 HAART 治疗的 HIV-1 单纯感染组和 HIV-1/HCV 合并感 染组及健康对照组细胞内 IFN-γ、IL-7、IL-21 的 mRNA 水平比较 P24 抗原表位刺激培养后，HIV-1 单纯感染组 CD8+T 细胞的 IFN-γ mRNA 水平明显高于 CD4+T 细胞（P0.05）。无论有无 P24 特异性抗原表位刺激，健康 对照组 PBMC 中 IFN-γ的 mRNA 水 平均 明 显 高 于 HIV-1 单 纯 感 染 组 和 HIV-1/HCV 合并感染组（P0.05）； P24 抗原表位刺激后，HIV-1/HCV 合并感染 组 PBMC 中 IL-7 mRNA 水平明显高于 HIV-1 单纯感染组（P0.05）；无论有无 P24 特异性抗原表位刺激，各组 PBMC 中 IL-21mRNA 水平相比均无明显差异 （P0.05）。 实验二 ICS 检测 HIV-1 单纯及合并 HCV 感染者分泌 IL-4，IL-17A，IL-21， IL-21R，IFN-γ的 CD3+T 淋巴细胞比例 实验对象：以未 HAART 治疗的 24 例 HIV-1 单纯感染者和 21 例 HIV-1/HCV 合并感染者，及 20 例健康对照组为研究对象。 实验方法：采用细胞内细胞因子染色法（intra-cellular CK staining，ICS）， 以上述 HIV-1 P24 区域重叠肽段库作为特异性肽段表位，刺激上述研究对象的 PBMC，检测使用与未使用 P24 抗原表位刺激后细胞内分泌 IL-4、IL-17A、IL-21、 IL-21R、IFN-γ的 CD3+T 淋巴细胞比例，并用单因素方差分析方法进行统计分 析。 实验结果：未接受 HAART 治疗的 HIV-1 单纯感染组和 HIV-1/HCV 合并感 染组及健康对照组细胞内分泌 IL-4、IL-17A、IFN-γ、IL-21、IL-21R 的 T 淋巴 细胞比例比较 比较使用与未使用 P24 抗原表位刺激后的结果显示，三组 T 淋巴细胞内的 分泌 IL-4、IL-17A、IFN-γ、IL-21、IL-21R 的比例变化不显著（P0.05）。在无 P24 抗原表位刺激培养后，HIV-1 单纯感染组的 CD3+IL-4+/ T 淋巴细胞明显高于 健康对照组（P0.05），HIV-1/HCV 合并感染组 CD3+IL-4+/T 淋巴细胞也高于健 康对照组，但差异不显著（P0.05）；而在 P24 抗原表位刺激培养后，三组 CD3+IL4+/T 淋巴细胞差异不显著（P0.05）。无论有无 P24 抗原表位刺激培养， HIV-1 单纯感染组 CD3+IL17-A+/