hiv1单纯及合并hcv感染对hiv1特异性细胞免疫应答的影响-effects of hiv - 1 infection alone and combined with hcv on hiv - 1 specific cellular immune response.docx

目 录 中文摘要1 英文摘要5 HYPERLINK \l _bookmark0 缩略语表 10 研究背景12 实验内容20 主要仪器 20 主要试剂及耗材20 实验一 HIV-1 单纯及合并 HCV 感染的 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞及 PBMC 内 IL-7、 IL-21、IFN-γmRNA 水平测定 24 实验二 ICS 检测 HIV-1 单纯及合并 HCV 感染者分泌 IL-4，IL-17A，IL-21，IL-21R， IFN-γ的 CD3+T 淋巴细胞比例 46 实验三 ELISPOT 检测 HIV-1 单纯及合并 HCV 感染的 HIV-1 特异性 CTL 应答 57 总 结59 参考文献60 综 述 67 个人简历及研究生期间发表论文 80 致 谢81 HYPERLINK \l _bookmark1 学 位 论 文 原 创 性 声 明82 中文 中文摘要 广州 广州医学院硕士学位论文 HIV-1 单纯及合并 HCV 感染对 HIV-1 特异性细胞免疫应答的影响 PAGE PAGE 13 PAGE PAGE 10 HIV-1 单纯及合并 HCV 感染对 HIV-1 特异性 细胞免疫的影响 专 业 名 称： 内科学（传染病学） 学位申请人： 曹孟丽 导 师： 唐漾波 教授 中文摘要 人类免疫缺陷病毒 1 型（Human Immunodeficiency Virus Type 1，HIV-1）与 丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus，HCV）合并感染的临床治疗和相关致病机制研 究是目前临床面临的难题和研究热点。由于 HIV-1 和 HCV 的传播途径相同，均 通过血液及血液制品、性途径、母婴途径传播，HIV-1/HCV 合并感染的现象非 常 普 遍 。 随 着 高 效 抗 逆 转 录 病 毒 治 疗 (Highly Active Anti-Retroviral Therapy,HAART)在艾滋病中的广泛和规范应用，机会性感染的发病率和死亡率 都已显著下降，而合并 HCV 感染所致的肝损害已经成为艾滋病患者死亡的主要 原因之一；抗 HCV 治疗的低有效率和 HAART 治疗中不良反应的增加；中国国 内流行的 HCV 基因型及准种复杂而又难治，这些都使得对 HIV-1/HCV 合并感染 者的治疗更加棘手。但究其原因，至今并不完全明了，很有必要从病毒学和免疫 学角度对 HIV-1/HCV 合并感染者进行深入研究。 既往很多研究已证实细胞因子在 HIV-1 感染疾病进展过程中发挥了重要的 作用，有研究表明：在 HIV-1 感染过程中 IL-4 可抑制体内的病毒水平，IL-7 对 维持淋巴细胞的存活发挥了重要的作用，IL-17 可能参与 HIV-1 病毒的免疫反应， IL-21 可以促使 CD8+T 细胞增殖及保持活性，IFN-γ 是机体免疫系统抵抗病毒 感染的重要细胞因子之一。我们推测合并 HCV 感染会对 HIV-1 感染者上述细胞 因子产生影响，而有关 HCV 合并感染对 HIV-1 感染者上述细胞因子的影响阐述 得并不多，所以有必要对 HCV 合并感染对 HIV-1 感染者上述细胞因子的分泌状 况展开研究。 既往有关 HIV-1 感染和 HCV 感染的特异性细胞免疫应答的研究，结果均提 示特异性 CTL 反应对 HIV-1 感染和 HCV 感染的控制均具有重要作用，国内外也 有少部分关于 HIV-1/HCV 合并感染者的特异性细胞免疫应答的研究报道。但由 于地域和种族的差异，有必要对华南地区 HIV-1/HCV 合并感染者的特异性细胞 免疫应答进行研究。前期我们用 ELISPOT 方法检测 HIV-1 感染者的 CD8+T 细胞 对 HIV-1 合成表位的免疫主导应答发现：HIV-1 Gag 区域肽段诱导产生的 CD8+T 细胞的 IFNγ分泌细胞频率最高。故我们选用 HIV-1 P24 区域（Gag133~191）的 氨基酸序列人工合成的 12 个重叠肽段组成的肽段库作为特异性肽段表位，对 HIV-1/HCV 合并感染者和 HIV-1 感染者的 HIV-1 特异性 CTL 应答进行研究。 实验一 HIV-1 单纯及合并 HCV 感染的 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞及 PBMC 内 IL-7、IL-21、IFN-γmRNA 水平测定 实验对象：以中国华南地区的已 HAART 治疗的 25 例 HIV-1 单纯感染和 22 例 HIV-1/HCV 合并感染者，及 20 例健康对照者为研究对象。 实验方法：分别采用免疫磁珠分选技术、实时荧光定量 PCR 方法，以上述 HIV-1 P24 区域重叠肽段库作为 HIV-1 特异性肽段表位，刺激从上述三组研究对 象的外周血单个核细