hiv1转染rna干扰靶向atp6i基因防治大鼠股骨头坏死塌陷的实验研究-experimental study on hiv - 1 transfected rna interference targeting atpp6i gene to prevent femoral head necrosis and collapse in rats.docx

目录中文摘要?????????????????????????????????IABSTRACT???????????????????????????????Ⅱ前言??????????????????????????????????1一、材料和方法??????????????????????????????2（一）实验材料?????????????????????????????21.实验室??????????????????????????????22.主要仪器?????????????????????????????23.主要试剂?????????????????????????????24.实验动物?????????????????????????????3（二）实验方法?????????????????????????????31.大肠杆菌内毒素用量的换算和溶液的制备??????????????32.siRNA序列的设计及合成??????????????????????33.模型制备及给药??????????????????????????34.处死动物取材??????????????????????????45.生化指标检测??????????????????????????46.组织病理学观察??????????????????????????47.Atp6i-mRNA基因定量检测?????????????????????4（三）数据统计????????????????????????????5二、实验结果???????????????????????????????6（一）一般情况观察?????????????????????????6（二）生化指标???????????????????????????61.血钙、血磷检测结果??????????????????????62.血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b检测结果?????????????7（三）组织病理学?????????????????????????71.一般观察?????????????????????????72.空骨陷窝率?????????????????????????93.破骨细胞计数?????????????????????????9（四）Atp6i基因定量PCR检测????????????????????101.骨组织总RNA提取方法????????????????????102.逆转录实验??????????????????????????103.Atp6i基因表达水平分析－实时荧光定量PCR分析?????????114.结果?????????????????????????????12三、分析与讨论??????????????????????????????13（一）祖国医学对激素性股骨头坏死的认识????????????????13（二）特异性破骨细胞抑制剂对大鼠相关生化指标的影响??????????13（三）HIV-1载体介导的RNA干扰及其生物安全性????????????14（四）特异性破骨细胞抑制剂对大鼠股骨头Atp6i基因表达量的影响?????15（五）特异性破骨细胞抑制剂对大鼠股骨头坏死塌陷的影响?????????17（六）存在的问题???????????????????????????18结论?????????????????????????????????19参考文献????????????????????????????????20附图??????????????????????????????????23致谢??????????????????????????????????27文献综述????????????????????????????????28中文摘要HIV-1转染RNA干扰靶向Atp6i基因防治大鼠股骨头坏死塌陷的实验研究目的研究慢病毒转染RNA干扰靶向Atp6i基因对大鼠激素性股骨头坏死股骨头塌陷的防治作用。方法取体重为200g左右雄性SD大鼠52只，随机抽取42只，采用内毒素联合激素的方法造模，时间12周，随机抽取造模大鼠2只进行组织病理观察，确定造模成功。然后随机分为5组（空白A组、模型对照B组、阳性病毒C组、阴性病毒D组及密盖息E组），每组10只。A组和B组分别予生理盐水2ml/只肌肉注射，一周4次；C组予慢病毒siRNA阳性颗粒注入大鼠左侧股骨颈髓腔，骨蜡封填；D组予慢病毒siRNA阴性颗粒注入大鼠左侧股骨颈髓腔，骨蜡封填；E组予2U/kg密钙息肌肉注射，一周4次。2周后，取静脉血，离心取出上清，测血清中血钙、血磷和血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b（Trap-5b）的含量，处死动物取出双侧股骨头，分别进行A