hiv1高暴露未感染人群淋巴细胞活化状态与hla分型的关系-relationship between lymphocyte activation status and hla typing in hiv - 1 highly exposed and uninfected population.docx

HIV-1高暴露未感染人群淋巴细胞活化状态与HLA分型的关系博士研究生：王晓辉（D200878024）导师：聂绍发教授摘要研究目的1.以中国汉族HIV-1暴露而血清阴性者（HIV-1-exposedseronegativesubjects,ESNs人群）为研究对象，以健康对照人群和人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HumanImmunodeficiencyVirusType1，HIV-1）携带者为对照，探讨三组人群DC-SIGN和DC-SIGNR基因多态性与HIV-1不易感性的关系。2.分析三组人群HIV-1感染相关受体的表达差异，从蛋白质表达水平上寻找与HIV-1不易感性相关的受体。3.从基因多态性的角度解释与HIV-1不易感性密切相关的受体差异表达原因。研究方法应用扩增片段长度多态性（PCR-ALFP）的方法进行DC-SIGN和DC-SIGNR基因多态性分析；应用流式细胞术分析HIV-1感染相关受体的表达差异；应用序列特异引物PCR(sequence-specificprimers，PCR-SSP)分析HLA基因多态性；应用SPSS13.0统计软件分析三组人群之间受体表达和基因型分布的差异。主要研究结果1.DC-SIGN在三组人群中以7/7型为主,三组人群共检出9个非7/7基因型，但DC-SIGN各基因型分布差异无统计学意义（P=0.648）；DC-SIGNR具有高度多态性，7/5、5/5和6/7基因型的频率从ESN人群、健康对照人群和HIV-1携带者逐渐降低，同时5和6等位基因的频率也呈现均匀下降，但各基因型分布差异无统计学意义（P=0.782）；2.ESNs人群T淋巴细胞HLA-DR+CD4和HLA-DR+CD8均显著性低于健康对照人群（P=0.024，0.009），这两项指标同时呈现显著性正相关（P0.001，r=0.960）；利用HLA-DR+CD8的双峰分布特征可以将健康对照人群分为高低表达两群；3.确切概率法卡方检验结果显示，三个基因座的多态性位点中只有A*03和B*55在三组人群中的分布差异有显著性。健康对照人群HLA基因型的分析发现，A*02和A*24基因型在HLA-DR+CD8表达高低两组的分布有显著性差异（P=0.020，0.038）；等位基因分析也验证了这个多态性变异分布的差异（P=0.007，0.009），DRB1*09等位基因分布也有显著性差异（P=0.028）；A*02多态性变异与HLA-DR在CD8阳性细胞表面的表达有显著性负相关（P=0.008）；A*24多态性变异与HLA-DR在CD8阳性细胞表面的表达有显著性正相关（P=0.045）。研究结论1.我国汉族人群DC-SIGN基因多态性变异很低，没有继续研究的意义；DC-SIGNR基因多态性对于HIV-1不易感性的意义需要大样本的验证或细胞生物学实验数据的支持；2.对于中国汉族人群，T淋巴细胞低活化状态与中国汉族人群HIV-1不易感性密切相关，从统计学分析和生物学意义上可以将中国汉族人群按照HLA-DR+CD8活化高低分为HIV-1易感人群和不易感人群；3.HLAA*02多态性变异可能是中国汉族人群HIV-1感染的保护性因素，而HLAA*24多态性变异可能是感染的危险因素。创新性1.首次在国内ESNs人群的研究中设定了定量的的入选标准；2.在国内首次报道HLA-DR的高低表达与中国汉族人群HIV-1不易感性密切相关；3.首次报道HLA-A*02多态性变异可能是中国汉族人群HIV-1感染的保护性因素，而HLA-A*24多态性变异可能是感染的危险因素。关键词:HIV-1；ESNs人群；人类白细胞抗原（HLA）；DC-SIGN；DC-SIGNR;HLA-DR；HIV-1感染相关受体；基因多态性；易感性ThecorrelationbetweenthestatusofTlymphocyteandHLAgenotypeofHIV-1HighlyexposedPersistentlySeronegativeIndividuals(ESNs)Applicant:WangXiao-hui（D200878024）Supervisor:Prof.NieShao-FaAbstractObjective1.SettingHIV-1-exposedseronegativesubjects(ESNs)ofHanChineseastheresearchobjective,healthypeopleandHumanImmunodeficiencyVirusType1(HIV-1)carriersasthecontrolpopulation,toexploretherelationshipbetweenthegenepolymorphismofDC-SIGN,DC-SIGNRandHIV-