法医物证课件第二章 节 红细胞血型.pptVIP

A2基因结构 C467T 1059C单碱基缺失（图6-4） 五、ABO血型的测定 ABO血型的测定途径 测定抗原 用已知的抗体测定未知的抗原—正定法 测定抗体 用已知的抗原测定未知的抗原—反定法 ABO血型的测定方法 一）凝集实验 ———————————————————— 正定法 反定法 血型 ——————— ——————— 抗A 抗B Ac Bc ——————————————————————— + — — + A — + + — B + + — — AB — — + + O ——————————————————————— 二）抗体标记法 酶联免疫吸附实验（ELISA) 原理： Ag+Ab—E Ag—Ab—E S(显色反应） 三） ABO血型DNA分型 ABO血型的PCR-RFLP分型 ABO血型的PCR-SSP分型 ABO血型的PCR-RFLP分型原理 1） ABO基因结构中， A基因与B基因之间有7个 单碱基替换，其中有 G700A; O基因有第 258G 单碱基缺失。 2） 选择2个识辨G700A和258G缺失的特异性限制酶。 3）引物1和引物2扩增片段200（199）bp, 包含第 258位碱基。 A、B基因扩增片段200bp, O基因扩增片段199bp。 O基因第 258G 缺失，构成Kpn1识辨点,酶切后 为171bp和28bp,有 171bp出现说明有O基因。 4）物3和引物4扩增片段159bp,包含第 700位碱基。 A、O基因为700G， B基因为700 A ，构成Alu1识 辨点,酶切后产生118bp和41bp,所以有 118bp出现 说明有B基因。 ABO血型的PCR-RFLP分型（原理） A、B基因 CGTGGTGACCCCTT O基因 CGTGGT – ACCCCTT 258 Kpn1 A、O基因 CACCCCGGCTTCT B基因 CACCCCAGCTTCT 700 Alu1 A、B、 O基因特异性限制酶Alu1和Kpn1识辨点 ABO血型的PCR-RFLP分型（原理） ————————————————————— 引物1引物2 Kpn1酶切 引物3引物4 Alu1酶切 基因型 ———————————————————————— 酶切模式 可见片段（bp) 酶切模式 可见片段（bp) ———————————————————————— AA 不切 200 不切 159 AO 半切 200，171，28 不切 159 BB 不切 200 全切 118，41 BO 半切 200，171，28 半切 159, 118，41 AB 不切