微生物学野外实习课件.pptVIP

天目山微生物学野外实习 南京师范大学生命科学学院 袁生 微生物野外实习目的 1．实地观察天目山自然环境和生态特点，了解微生物在该生态空间中的组成、分布、特性、相互关系以及它们与环境间的相互作用，认识微生物在生态系统中的重要地位。 2．通过对比天目山不同人类活动区、不同海拔高度区和不同主要植被区的空气、水体、土壤和植物体微生物的差异，了解环境因素对微生物种群及数量分布的影响，增强环境保护意识； 实习分成三个小组： 以小组为单位分配器材、采样和实验 土壤微生物实习目的 通过对天目山部分区域不同海拔高度及主要植被覆盖土壤样品中不同微生物类群的检测，了解自然环境及植物种群对天目山土壤中的微生物种群及数量分布的影响。 一、土壤微生物实习 1. 土壤微生物样品的采集点 (1)常绿阔叶林下的土壤 (2)竹林下的土壤 (3)农田的土壤 2. 土壤微生物采样工具 3. 土壤采样方法 除去土壤表面植被和枯枝落叶，将土壤采样器垂直插向土壤深处，然后拔出，取土壤层10cm处约1cm厚的土壤样品，同一点不同点土壤样品放一个塑料袋内混合均匀。 4. 土壤微生物样品稀释液的制备 天平称取1g 土样加入到含有若干粒玻璃珠及9ml无菌生理盐水的50ml 三角瓶中振荡制备而成10-1土壤悬浮液。 取灭菌2mL小离心管，使用1000 mL移掖器（使用灭菌枪头）分别向各管加入1125 mL灭菌生理盐水，取125 mL 10-1土壤悬浮液加入到含1125 mL 灭菌生理盐水的小离心管中，混匀，此为10-2土壤悬浮液，然后依次制备10-3、10-4和10-5土壤悬浮液。 125 mL 1125 mL 1250 mL 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 5. 浇注平板和培养 三种土样 牛培：10-3、10-4和10-5 马培：10-2、10-3和10-4 每个稀释度2块平板 注意事先平板标记 ~15 mL融化并冷却至50 ℃左右（不烫手）琼脂培养基 a.根据不同微生物菌落的不同特征，选取每皿菌落数适宜的平板以点涂法进行计数(牛肉膏蛋白胨琼脂、高氏一号琼脂平板中宜选择菌落数为20-200，马丁氏琼脂平板选择菌落数在10-100进行计数) 6. 土壤样品中微生物菌落计数 b.每g土壤样品中微生物菌落数 = 菌落平均数×稀释倍数 要根据土壤含水量换算成每g干土样品中微生物菌数 不同类型微生物菌落形态比较 二、水体微生物实习 实习目的 1．通过对天目山不同水体生态环境的考察，了解人类活动对水体质量的影响。 2．通过对天目山不同水体微生物种类和数量的观察和分析，了解微生物种群与水体环境生态之间的相互关系。 3．了解水体微生物的分析结果是评价水质的重要指标，水样的菌落总数是作为判定水源是否被污染的标志。 1. 水体微生物样品采集 （1）采样点 禅源寺附近的溪流 红庙附近的小水塘 西关水库边近畜禽养殖地附近水体 （2）水体水生态因子测定 水温、pH （3）水样采集 桶式深水采样器，采集表面下约10 cm处的水样，用灭菌具塞试剂瓶接受水样适量，盖好塞子。 （一）水体中细菌总数的测定（平板菌落计数法） 2.水样稀释 稀释方法如前。 使用灭菌的2mL小灭菌离心管，向1125mL灭菌生理盐水加入125 mL 原始水样制得10-1水样稀释液，依次制备10-2、10-3、10-4、10-5水样稀释液。 溪流水： 原样、10-1、10-2 小水塘水： 10-1～10-3 养殖场附近水：10-3～10-5 3．浇注平板和培养 吸取1 mL 水样加入无菌培养皿中，倒入15 mL左右融化并冷却至50 ℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，混匀，各样品2个平行样。 30 ℃ 或室内自然温度倒置培养24 h后对各平板上的菌落进行计数。若菌落太小可继续至48 h（或更长）。 例次 不同稀释度的平均菌落数 两稀释度菌落数之比 菌落总数 （个/mL） 备注 10－1 10－2 10－3 1 1365 164 20 － 16400或1.6×104 两位数以后的数字采用四舍五入的方法去掉 2 2760 295 46 1．6 37750或3.8×104 3 2890 271 60 2．2 27100或2.7×104 4 无法计数 1650 513 － 513000或5.1×105 5 27 11 5 － 270或2.7×102 6 无法计数 305 12 － 30500或3.1×104 4．菌落计数及统计分析 平板菌落计数范围是30～300个菌落，实验检测的3个稀释梯度，一般取两个有效浓 度进行结果统计。如果