cpgodn抑制人肝癌细胞hepg2增殖及增强化疗敏感性的机制分析word格式论文.docxVIP

展望 ................................................................... 36本研究的主要创新点 ..................................................... 38References: 39附录一 硕士期间发表的论文 .............................................. 45附录二 缩写词及中英文对照表 ............................................ 46致谢 ................................................................... 47中文摘要目的最近的研究表明一种人工合成并包含未甲基化的 CpG 寡聚核苷酸（CpG-ODN）在 癌症治疗方面具有潜在疗效。本研究中，我们探讨 CpG-ODN 对人肝癌细胞 HepG2 的体 外抑制活性及其分子机制；同时，评价 CpG-ODN 增强化疗药物抑制肝癌细胞增殖的作 用机制；方法采用 MTS 法检测 CpG-ODN 对人肝癌细胞系 HepG2 和 Bel-7402 及人肺癌细胞系 A549 的体外增殖抑制活性，同时探讨 CpG-ODN 抑制 HepG2 细胞增殖的剂量-时间-效应关系； 通过 Real-Time PCR 法检测 CpG-ODN 对 HepG2 细胞、Bel-7402 细胞、A549 细胞内 TLR9 mRNA 的表达影响以及 CpG-ODN 对 HepG2 细胞内抗凋亡因子 Bcl-2 mRNA 的表达影响。通过 CpG-ODN 与五氟尿嘧啶（5-FU）单独或者联合体外刺激 HepG2 细胞，采用 MTS 法检测细胞活性、Hoechst 33258 法检测细胞核的形态变化以及利用流式细胞仪分析 HepG2 细胞的细胞周期和细胞凋亡的变化。同时，利用 Real-Time PCR 法分析 CpG-ODN 与 5-FU 单独或者结合刺激对 HepG2 细胞内抗凋亡因子 Livin 和 Survivin mRNA 的表 达影响。结果CpG-ODN 对 HepG2 细胞具有较强的体外抑制活性，并且呈浓度依赖性。然而， CpG-ODN 对 Bel-7402 细胞和 A549 细胞的细胞活性不产生影响。Real-Time PCR 的结 果阐明 CpG-ODN 对 HepG2 细胞、Bel-7402 细胞和 A549 细胞内 TLR9 mRNA 的表达不产 生影响。Bcl-2 家族抗凋亡因子与肿瘤的发生发展具有密切的关系， Bcl-2 蛋白属于 Bcl-2 抗凋亡蛋白家族成员之一,Bcl-2 的表达下调能够促进抗肿瘤药物诱导肿瘤细胞 的凋亡。Real-Time PCR 的实验结果表明 CpG-ODN 下调 HepG2 细胞内抗凋亡因子 Bcl-2 mRNA 的表达。相比较于 CpG-ODN 和 5-FU 单独刺激，CpG-ODN 与 5-FU 的联合刺激显著地降低 HepG2 细胞的细胞活性以及进一步诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞于 S 期。Livin 和 Survivin 蛋白属于抗凋亡蛋白，高度地表达于肿瘤组织而低表达于正常组织，肿瘤细 胞的凋亡与 Livin 和 Survivin 表达下调有关。Livin 和 Survivin 的过表达与化疗耐 药性的产生有关，而 Livin 和 Survivin 的表达下调能够改善肿瘤的化疗敏感性。IReal-Time PCR 的结果表明 5-FU 的单独刺激上调 HepG2 细胞内 Livin 和 Survivin mRNA的表达，CpG-ODN 的单独刺激下调 HepG2 细胞内 Livin 和 Survivin mRNA 的表达。然 而，CpG-ODN 与 5-FU 的联合刺激则下调 HepG2 细胞内 Livin 和 Survivin mRNA 的表达。 结论CpG-ODN 通过下调抗凋亡因子 Bcl-2 的表达而抑制 HepG2 细胞的增殖。在一定的 程度下，CpG-ODN 与 5-FU 的联合刺激进一步地诱导 HepG2 细胞的凋亡和细胞周期阻滞 于 S 期，从而增强 5-FU 抑制人肝癌细胞 HepG2 的增殖，其中可能涉及下调 HepG2 细 胞内抗凋亡因子 Livin 和 Survivin 的表达。因此，CpG-ODN 可能成为一种潜在的化疗 增敏剂。关键词：CpG-ODN; 人肝癌细胞; 细胞凋亡; 细胞周期; 化疗增敏剂;IIMechanism of CpG-ODN inhibited proliferation and enhanced chemosensitivity