cox2shrna对大鼠肝纤维化tgfβ1smad信号转导通路的影响word格式论文.docxVIP

主要英文缩略语英文缩写ALT英文全称glutamic-pyruvic transaminase中文名称谷丙转氨酶ASTAspertate aminotransferase谷草转氨酶CCl4Carbon tetrachloride四氯化碳cDNAComplementary deoxyribonucleic acid互补脱氧核糖核酸COXCyclooxygenase环氧合酶DEPCDiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯dNTPDeoxyribonucleic triphosphate脱氧核苷三磷酸EBEthidium bromide溴化乙锭ECMExtracellular matrix细胞外基质HEHFHematoxylin-EosinHepatic fibrosis苏木素-伊红肝纤维化HSCHepatic stellate cell肝星状细胞IHimmunohistochemistry免疫组织化学MASSONMaSong dyeing马松染色mRNAMessenger ribonucleic acid信使核糖核酸NSNimesulide尼美舒利ODOptical density光密度PBSphosphate-buffered saline磷酸盐缓冲液RT-PCRReverse trans PCR反转录聚合酶链反应ShRNASmall hairpin RNA短发夹 RNATaqTCThermos-aquaticus-EDTA buffertotal cholesterol耐热 DNA 聚合酶总胆固醇TGtrigelyceride甘油三酯TGF-βTransforming growth fator β转化生长因子β12COX-2ShRNA 对大鼠肝纤维化TGF-β1/SMAD 信号转导通路的影响硕士研究生张巧导师阳学风 教授中 文 摘 要目的研究靶向 COX-2ShRNA 对大鼠肝纤维化 TGF-β1/SMAD 信号 转导通路的影响，为临床治疗肝纤维化提供新思路。方法SPF 级雄性健康 SD 大鼠 50 只随机分五组正常组（A 组）、 模型组（B 组）、COX-2ShRNA 组（C 组）、空载体组（D 组）、尼美 舒利组（E）。B、C、D、E 组根据文献以高脂饮食+40%CCL4 花生 油灌胃(2ml/kg?5d)建立大鼠肝纤维化模型，造模第 1 周起，C 组每 只大鼠每天通过尾静脉注射 100ul COX-2ShRNA（滴度为 1×1010 PFU/ml）重组腺病毒载体,进行体内转染；D 组注射等量不含 COX-2 ShRNA 基因的重组腺病毒空载体；E 组予以尼美舒利（NS）灌胃 2ml/kg?d；A 组、B 组给予等量生理盐水；12 周末最后一次给药后 禁食 12h 处死大鼠，计算肝湿重及肝指数，检测血清生化指标变化， HE、MASSON 染色分析纤维病变程度。RT-PCR、免疫组化法观察 大鼠肝组织 COX-2、TGF-β1 与 SMAD1-5 的 mRNA 及蛋白的表达， 实验数据用 SPSS17.0 统计软件对数据进行统计分析。结果1.肝湿重与肝脏指数结果：与A组相比C组大鼠肝湿重与肝指3数值明显上升（P＜0.05）；与B、D组相比C组大鼠肝湿重及肝指数值明显下降（P＜0.05）。2.血清生化检测结果：与A组相比C组大鼠血清生化指标AST、 ALT、TC、TG明显水平上升（P＜0.05）；与B、D组相比C组大鼠血 清生化指标AST、ALT、TC、TG水平明显下降（P＜0.05）。3.HE、MASSON染色的结果：与A组相比C组大鼠肝肝纤维化病 变程度明显加重（P＜0.05）；与B、D组相比C组大鼠肝纤维化病变 程度明显减轻（P＜0.05）。4.COX-2、TGF-β1及SMAD1-5的RT-PCR定量检测及免疫组织化 学法结果：与A组相比C组大鼠肝组织中COX-2、TGF-β1及SMAD1-5 的mRNA表达明显上升（P＜0.05）；与B、D组相比C组大鼠肝组织 中COX-2、TGF-β1及SMAD1-5的mRNA表达明显下降（P＜0.05）。5.COX-2与TGF-β1、SMAD1-5的mRNA表达及蛋白表达的相关 性分析：COX-2mRNA 表达与TGF-β1、SMAD1-5mRNA表达成正相 关。COX-2蛋白表达与TGF-β1、SMAD1-5的蛋白表达成正相关。结论1.COX-2 ShRNA可有效降低大鼠肝组织COX-2的表达。 2.COX-2ShRNA可能通过抑制肝纤维化大鼠肝组织中COX-2、TGF-β1、SMAD1-5等基因的表达产生抗纤维化作 用。关键词COX-2ShRNA,肝纤维化,TGF-β1,SMAD ,尼美舒利4Effect of COX-2ShRNA on the TGF-β1/ S