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btg1在喉鳞状细胞癌中发生的作用及分子机制分析word格式论文
独创性说明本人郑重声明:所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究 工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的 地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果,也不包含 为获得河北联合大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材 料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了 明确的说明并表示了谢意。论文作者签名:日期:年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解河北联合大学有关保留 、使用学位论文的规定, 即:已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文 ,学校有权保 留、送交论文的复印件,允许论文被查阅和借阅;学校可以将学位论 文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进行公开、检 索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间:□ 自授予学位之日起;□ 自年月日起。作者签名:导师签名:签字日期:年月日签字日期:年月日摘要摘要目的 1 分析喉鳞状细胞癌组织和喉部正常组织中 BTG1 蛋白表达水平差异,研究 BTG1 蛋白在喉鳞状细胞癌组织中表达水平与喉癌生物学行为之间的关系。2 研究 BTG1 基因高表达对喉癌细胞的生长增殖、凋亡的影响及其相关作用机制。探讨在 喉鳞状细胞癌发生发展中 BTG1 的作用及机制,并为 BTG1 作为预测喉癌发生发展 的新分子标志物及基因治疗的靶点提供理论基础和实验依据。方法 1 应用免疫组织化学、Western blot 实验方法检测 70 例喉鳞状细胞癌组织及35 例喉部正常组织中 BTG1 蛋白的表达情况。2 构建 pEGFP-N1-BTG1 真核表达 质粒,培养并转染喉癌 Hep-2 细胞,分为实验组(转染 BTG1 的 Hep-2 细胞)和对 照组(转染空质粒的 Hep-2 细胞)。上述两组分别应用实时荧光定量 PCR 和 Western blot 方法鉴定两组细胞中 BTG1 mRNA 和 BTG1 蛋白的表达水平;MTT 实 验检测转染细胞的生长增殖能力;流式细胞仪检测细胞细胞周期分布;磷脂酰丝氨 酸外翻分析(Annexin V-FITC/PI)实验测定细胞早晚期凋亡的情况;Western blot 法测定转染细胞的细胞周期调控蛋白 CyclinD1、抗凋亡蛋白 Bcl-2 的表达水平。 结果 1 BTG1 与喉癌生物学行为的关系:喉癌患者中 BTG1 蛋白表达的阳性率明显 低于正常组差异有统计学意义(P<0.05)。在 70 例喉鳞状细胞癌组织中,BTG1 蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤所在部位无关(P>0.05);BTG1 蛋白的表 达水平与肿瘤局部浸润深度、区域淋巴结转移、病理分期、组织学分级呈负相关, 不同期别间差异有统计学意义(P<0.05)。2 喉癌 Hep-2 细胞中实验组与对照组 相比:实验组细胞 BTG1mRNA 与蛋白的表达水平均显著提高(0.908±0.086 和 0.921±0.091vs0.212±0.017 和 0.308±0.047,P<0.05);实验组细胞生长速度减慢, 细 胞 增 殖 能 力 降 低 ( P < 0.05 ) ; 实 验 组细胞 中 CyclinD1 蛋 白 表 达 水 平 降 低( 0.436±0.023vs0.916±0.092 , P < 0.05 ) , 细胞 周 期 的 G0/G1 期 细 胞 比例 升 高(85.1±5.2%vs63.8±3.1%,P<0.05),S 期细胞比例降低(8.3±1.1%vs23.1±1.5%,P < 0.05 ) ; 实 验 组 细 胞 磷 脂 酰 丝 氨 酸 外 翻 增 加 , 细 胞 早 期 凋 亡 显 著( 10.3±1.1%vs2.8±0.3% , P < 0.05 ) , 细 胞 中 抗 凋 亡 蛋 白 Bcl-2 表 达 水 平 降 低(0.167±0.009vs0.834±0.084,P<0.05)。结论 1 喉癌组织比正常组织 BTG1 蛋白的表达阳性率明显降低,其表达水平与肿 瘤局部浸润深度、区域淋巴结转移、临床分期、组织学分级呈负相关,提示 BTG1 在喉鳞状细胞癌的发生和发展中可能起着重要的生物学作用。2 BTG1 高表达能明- I -河北联合大学硕士学位论文显 抑 制 喉 癌 Hep-2 细 胞 的 增 殖 、 诱 导 凋 亡 , BTG1 反 向 调 节 细 胞 周 期 蛋 白CyclinD1、抗凋亡蛋白 Bcl-2 进而能调控细胞周期阻滞、促进细胞凋亡可能是其具 体的发生机制之一。图 8 幅;表 2 个;参 55 篇。 关键词:喉癌;BTG1;增殖;凋亡;细胞周期 分类号:R739.65;II -摘要AbstractObjective 1 We aimed to analyze the differential
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