btg2基因在乳腺癌中的生物学功能与相关机制的分析word格式论文.docx

摘要BTG2基因在乳腺癌中的生物学功能与相关机制的研究面的实验，并对其机制进行初步探讨，研究BTG2基因在基因增敏方面应用的可能性。对高表达BTG2基因的MDA-MB-231/BTG2细胞和MCF-7/BTG2细胞应用不同剂量的x射线照射后，进行克隆形成实验，同时分别应用两种乳腺癌细胞的母细胞和“空”质粒细胞作为对照，观察BTG2基因对乳腺癌细胞放射敏感性的影响。应用流式细胞术观察BTG2基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7受照后细胞周期变化的影响。应用Westernblot检测BTG2基因对乳腺癌细胞MDA-MB-231 和MCF-7 受照后周期相关蛋白和辐射相关蛋白的影响。MDA-MB-231/BTG2细胞和MCF-7/BTG2细胞存活曲线均明显低于相应的母细胞和“空”质粒细胞。MCF-7/BTG2和MDA-MB-231/BTG2细胞在受照后，G0/G1 期和G2/M 期细胞比例均高于母细胞和“空”质粒细胞，同时，照射后的MCF-7/BTG2 和MDA-MB-231/BTG2 细胞均出现了明显的sub G1 峰。MDA-MB-231和MCF-7两种乳腺癌细胞在受照后，均表现为BTG2蛋白表达增加，凋亡相关蛋白Bax蛋白表达增高，周期相关蛋白CyclinD1蛋白表达降低，BTG2 基因转染细胞的这种变化更为明显。在照射前，与母细胞和“空”质粒细胞相比，MDA-MB-231/BTG2 细胞BTG2 蛋白上调，XRCC1 蛋白下调；受照射后，MDA-MB-231/BTG2细胞BTG2蛋白明显上调，同时辐射相关蛋白Ku-70蛋白、FEN-1 蛋白和XRCC1 蛋白均表达下调。在MCF-7 三种细胞，在照射前，MCF-7/BTG2细胞即表现为BTG2蛋白表达上调，辐射相关蛋白Ku-70蛋白、FEN-1 蛋白和XRCC1蛋白表达下调，在照射后，这种表现更为明显。结论：(1)成功构建pcDNA3-BTG2 真核表达质粒，并且成功建立高表达BTG2基因的乳腺癌细胞MCF-7 和MDA-MB-231 稳定转染细胞株。(2)BTG2基因在体外可以抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的增殖能力、贴壁能力、迁移和转移能力。BTG2 基因使MCF-7 细胞发生更明显G1 期阻滞，使MDA-MB-231细胞发生更明显G2期阻滞，机制可能与BTG2蛋白可下调CyclinD1和CyclinB1蛋白有关。(3)BTG2基因抑制肿瘤细胞转移可能与调控部分肿瘤转移相关基因有关，在MDA-MB-231细胞，BTG2基因上调SET、NME1、NME2和RB1基因，下调RHOCBTG2基因在乳腺癌中的生物学功能与相关机制的研究摘要和PLAUR基因。(4)BTG2蛋白可以直接结合ER-β蛋白形成复合体,并明显地上调ER-β的转录活性。(5)BTG2基因降低了乳腺癌细胞在裸鼠体内的成瘤率，同时降低了移植瘤在裸鼠体内的生长速度。BTG2 基因降低了MDA-MB-231 细胞的远处转移能力。(6)BTG2基因增加了乳腺癌细胞的放射敏感性，其机制可能与上调Bax基因促进受照后细胞凋亡，下调CyclinD1蛋白使细胞发生G1期阻滞，同时下调部分辐射相关蛋白Ku-70 蛋白、FEN-1 蛋白和XRCC1蛋白有关。关键词：乳腺癌；BTG2；生物学行为；转移；细胞周期；细胞凋亡；放射敏感性；放射治疗；基因治疗；ER-β;转录活性作者：胡旭东指导老师：樊赛军教授AbstractStudiesonBioglogicalFunctionsandUnderlyingMechanism(s)ofBTG2GeneinBreastCancerStudiesonBioglogicalFunctionsandUnderlyingMechanism(s)ofBTG2GeneinBreastCancerAbstractTheBTG2geneisonememberoftheBTG/TOBanti-proliferativegenefamily.A fewstudieshavesuggestedthatBTG2maybeanewcandidateoftumorsuppressor gene.ThecurrentstudywasdesignedtodeterminetheimpactsofBTG2overexpressionbystabletransfectionofpcDNA3-BTG2expressionvectoroncellgrowth,migration,metastasis andradiosensitivity in vitro and invivo inhuman breastcancerMDA-MB-231andMCF-7cells.Thethesisconsists