alc1chd1l sirna干扰对肝癌细胞mekerk信号通路及干性特征的影响word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 目 录  HYPERLINK \l _bookmark0 中文摘要 1  HYPERLINK \l _bookmark1 英文摘要 4  HYPERLINK \l _bookmark2 前 言 8  HYPERLINK \l _bookmark3 材料与方法 10  HYPERLINK \l _bookmark4 结 果 25  HYPERLINK \l _bookmark5 讨 论 31  HYPERLINK \l _bookmark6 结 论 34  HYPERLINK \l _bookmark7 参考文献 35  HYPERLINK \l _bookmark8 综 述 41  HYPERLINK \l _bookmark9 附 录 49  HYPERLINK \l _bookmark10 致 谢 52  HYPERLINK \l _bookmark11 学位论文独创性声明 53  HYPERLINK \l _bookmark12 学位论文知识产权权属声明 53  HYPERLINK \l _bookmark13 学位论文使用授权声明 53 中文摘要 ALC1/CHD1L siRNA 干扰对肝癌细胞 MEK/ERK 信号 通路及干性特征的影响 研究生： 冯 丽 导 师： 马宁芳 教授 中文摘要 背景与目的 多种肿瘤组织内存在肿瘤干细胞（cancer stem cells，CSCs）,肿瘤的增殖、复发 转移和耐药等都与 CSCs 密切相关；因此，以 CSCs 为治疗靶标可能是控制肿瘤发 生发展的有效途径。肝癌是世界上第 5 大恶性肿瘤，其发病隐匿、放化疗不敏感、 术后 5 年存活率低。近年来的研究结果证明肝癌组织中存在 CD133、CD90 及 OV6 等阳性标记细胞，表达干细胞自我更新相关分子如 OCT4、 Sox2、Nanog 等，具备 CSCs 生物学特征，有更强的致瘤性和抗化疗能力。因此，深入研究肝癌 CSCs 分子 调控机制对于临床选择特异性治疗靶标非常必要，是克服肝癌术后复发转移的希望 所在。ALC1(amplified in liver cancer 1) 又名 Chd1l (chromodomain helicase/ATPase DNA binding protein 1-like gene)，是从人肝癌细胞染色体 1q21 区分离并克隆出的癌 基因，编码 89KDa 的蛋白，含有保守的 SNF2_N 功能域、解旋酶功能域及 Macro 功能域，属 SWI2/SNF2 相关 ATP 酶超家族，与染色质解链及 DNA 修复有关。体 外实验发现 ALC1/CHD1L 阳性表达肿瘤细胞具有干细胞样特征：自我更新能力、 高致瘤性、耐药性及多分化潜能，动物实验发现 ALC1/CHD1L 对胚胎植入前内细 胞群的发育不可或缺，提示 ALC1/CHD1L 可能与多能性调节有关，但 ALC1/CHD1L 与肝癌 CSCs 是否有关目前尚不清楚，本文拟对此进行深入研究，并探讨相关分子 机制。 1 广州医科大学硕士学位论文 方法 1．PCR 检测肝癌细胞系 CHD1L mRNA 表达；流式细胞术检测肝癌细胞系中 CD133+ 细胞的百分比； 2．CD133 免疫磁珠分选 Huh7 细胞，CD133-PE、OV6-FITC 抗体对分选前后细胞进 行标记，流式细胞术检测分选前后 Huh7 细胞群内 CD133 及 OV6 的表达率；细 胞免疫荧光标记法检测肝癌 Huh7 及 HepG2 细胞中 ALC1/CHD1L 和 OV6 的共 表达率； 3．qRT-PCR 检测 ALC1/CHD1L siRNA 干扰对肝癌 Huh7 及 HepG2 细胞干性相关分 子 Oct4、Sox2、Nanog、Bmi1、β-catenin 表达的影响；MTS 实验及平板克隆实 验验证 ALC1/CHD1L siRNA 干扰后对 Huh7 及 HepG2 细胞增殖能力的影响。 4．RT-PCR 方法检测 ALC1/CHD1L siRNA 干扰对 RAF/MEK/ERK 信号通路的影响; Western blot 法从蛋白水平检测 ALC1/CHD1L siRNA 干扰后 MEK/ERK 通路相关 蛋白及其磷酸化蛋白、干性相关分子 OCT4 蛋白表达的变化； 结果 1. 肝癌细胞株 Huh7、HepG2、SSMC-7721 及 BEL-7402 均有 CHD1L mRNA 表达， 其中 Huh7 和 HepG2 细胞 CHD1L mRNA 表达水平明显高于 SSMC-7721 和 BEL-7402。流式细