ampk激活剂调节p21cip p27kip cyclind1诱导肝癌细胞株hepg2细胞周期停滞word格式论文.docxVIP

中文摘要背景及目的腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activatedproteinkinase，AMPK）是细胞能量调节的感受器。研究资料表明，AMPK激活剂二甲双胍及AICAR可对多种肿瘤细胞产生增殖抑制作用，其功能与AMPK对细胞周期调控作用密切相关。目前有关AMPK激活剂对肝癌细胞增殖抑制、细胞周期影响的报道较少，未见详细机制的报道。本研究将通过AMPK激活剂二甲双胍及AICAR对肝癌细胞株HepG2的增殖抑制、细胞周期影响及其作用机制的研究，为AMPK 成为抗肿瘤治疗的新靶点提供新的理论依据。材料和方法1. 用含10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100U/ml链霉素的RPMI-1640 培养基培养人肝癌细胞株HepG2 细胞。2. 用含不同浓度二甲双胍(2.5、5.0、10、20mM)，AICAR（50、100、250、500μM）的培养基分别处理HepG2细胞24、48、72h，以未予药物处理细胞为对照，噻唑蓝比色法(MTT法)检测二甲双胍及AICAR对HepG2 细胞增殖的影响。3. HepG2细胞用含10mM的二甲双胍的培养基和500μM的AICAR的培养基作用72h，经碘化丙啶（PI）单染法，用流式细胞分析仪（FCM）检测HepG2 细胞周期情况。4. 用含10mM的二甲双胍培养基和500μM的AICAR的培养基作用HepG2细胞24h，WesternBlot 检测AMPK磷酸化程度、以及G1/S调节点细胞周期调节蛋白p21CIP、p27KIP、cyclin D1、CDC2、CDK2表达量。5.HepG2细胞用含10mM的二甲双胍的培养基和500μM的AICAR的培养基作用24h ，DAPI 染色后荧光显微镜下观察HepG2 细胞凋亡情况。结果1.Westernblot结果显示，经二甲双胍及AICAR处理后，HepG2细胞AMPK 磷酸化程度较对照组增强。2.MTT法检测结果显示，与对照组比较，二甲双胍及AICAR能抑制HepG2细胞的生长，并且呈浓度和时间依赖性。3.流式细胞术检测结果显示，HepG2细胞经二甲双胍及AICAR处理24h 后，细胞周期发生G0-G1期停滞，G0-G1期百分比和对照组相比较，差别具有统计学意义。4.WesternBlot 结果显示，经二甲双胍及AICAR处理后，HepG2 细胞p21CIP 和p27KIP表达较对照组增强，cyclin D1 表达较对照组减弱，CDK2、CDC2表达与对照组比较无明显变化。5.DAPI染色观察可见，HepG2细胞经二甲双胍及AICAR处理24h后，镜下可见部分细胞核碎裂，细胞发生凋亡。结论1. AMPK激活剂诱导HepG2细胞增殖抑制。2.AMPK激活剂诱导HepG2细胞发生G0-G1 期细胞周期停滞。3.AMPK激活剂磷酸化激活HepG2细胞AMPK，上调p21CIP、p27KIP表达量，下调cyclinD1 表达量，CDC2、CDK2表达量无明显变化。4. AMPK激活剂诱导HepG2细胞凋亡。综上所述，AMPK激活剂通过磷酸化激活AMPK，上调p21CIP、p27KIP表达，下调cyclinD1 表达,抑制G1/S检查点，诱导肝癌细胞发生G0-G1期细胞周期停滞。关键词：肝癌细胞；AMPK激活；细胞周期停滞；细胞周期调节蛋白AbstractBackground and ObjectivesAMP-activatedproteinkinase(AMPK)isanenergy-sensing/signaling.Recentresearches haveshownthatactivatorsofAMPK,metforminandAICARhavecytotoxicityeffectsontumor cells, and the inhibitionofcell growth is possiblyassociatedwith the effect of cellcycle arrest.IthasbeenrarelyreportedaboutwhethermetforminandAICARcaninhibitthegrowthand affectthecellcycleprocessof hepatocellular carcinomacells(HCC).Themechanismsof growth inhibitionandcellcyclearrestofAMPKhavenotbeenwellunderstood.Inthisstudy,we investigatetheeffecton proliferationandcellcycleinhibitionofmetforminandAICARonHCC cellline,HepG2