ampk在线粒体中的分布及线粒体中ampkα1对细胞自噬的影响word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 摘 要 背景和目的： 5’单磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）是细胞 的能量感受器，调节细胞能量代谢，在正常细胞和癌细胞中均发挥重要的生物 功能，它的激活有助于纠正代谢紊乱，使其代谢趋向生理平衡。在细胞应急反 应中，细胞感受到能量危机, ATP 浓度下降，AMP 浓度上升，细胞内 AMP/ATP 比例上升，AMPK 被激活；在病理状态下，如代谢综合征、肿瘤等，常伴随能 量代谢失调，AMPK 活性下降，此时，药物激活 AMPK 可以使能量代谢恢复正 常。因此，AMPK 被视为治疗代谢性疾病与肿瘤的作用靶点。线粒体作为细胞 的能量工厂，参与人体众多生理与病理过程，而 AMPK 对能量代谢的调节与线 粒体的功能密不可分。越来越多研究表明，线粒体能影响 AMPK 的活性，同时 AMPK 也通过多方面对线粒体进行调节。但 AMPK 能否通过直接结合在细胞线 粒体内而发挥调节细胞功能，目前尚无报道。本研究旨在解决这一问题并探明 某些特定的功能是否归因于线粒体 AMPK。 方法: 1. AMPK 在线粒体的定位。采用免疫印迹和免疫荧技术检测 AMPK 在线 粒体的定位。为检测 AMPK 定位于线粒体的决定片段，我们使 HEK-293T 细胞 内表达 AMPKα1 亚基各片段，采用生化方法检测各片段是否定位于线粒体内。 2. 线粒体中 AMPK 的功能。为此目的，设计以慢病毒为载体，含有持续激 活的 AMPKα1 亚基的重组病毒，且在该持续激活的亚基上连接靶向线粒体的肽 段且在亚基氨基酸末端连接 Flag 抗原决定簇；将该重组病毒转染于肺癌细胞系 -A549 细胞中。随后研究线粒体 AMPK 对自噬的影响。 结果： 1. 内源性 AMPK 包括α亚基和β亚基不仅分布于其它亚细胞结构，也分 布在线粒体上。 2. AMPKα1 与线粒体的结合位点在其羧基末端的 392-548 氨基酸残基之 间，该结合位点与?亚基上的β亚基结合位点相重叠，由此表明α1 亚基直接 II 结合或者通过β亚基间接结合到线粒体上。 3. 线粒体靶向募集活性 AMPK 可以在无糖条件下增强自噬，表明线粒 体 AMPK 在自噬中发挥重要作用。 结论： 1. AMPK 存在于线粒体内且 AMPKα1 定位于线粒体的决定片段为其 羧基末端：391-548 氨基酸序列； 2. AMPK 在线粒体内对自噬发挥重要作用，表明在无糖时保护细胞； 关键词：AMPK；线粒体；亚细胞定位；自噬 III Ab Abstract ABSTRACT Background and objective： AMP-activated protein kinase (AMPK) serves as a fuel sensor that plays an important role in regulating energy metabolism in all cells under physiological and pathological circumstances. AMPK is activated under stress, when cells sense energy crisis concurrent with decreases in ATP levels and increases in AMP or the ratio of AMP to ATP. Such pathological conditions as metabolic syndrome and cancer are accompanied by deregulated energy metabolism and suppression of AMPK, under which pharmacological activation of AMPK tends to tune it to a normal level. As such, AMPK emerges as a promising therapeutic target for these disorders. The regulation of energy homeostasis by AMPK is closely related to the function of mitochondrion, which acts as an energy plant and is involved in both physiological and pathological processes. Mounting evidence has demonst