形态学科研基础1A.pptVIP

形态学科研基础 集中、简要地介绍用于形态学研究的主要技术、方法和试剂制备的基础知识。 形态学研究的特点是组织、细胞结构观察直观、定位准确，可信度高，材料易于保存，并可用于定性和定量分析，参考背景与目标结构反差较好。通过本课的学习，了解形态学研究发展的轨迹和现状，为日后从事生物、医学研究打好必要的基础。 掌握组织、细胞的形态学研究的基础知识、基本技能对更好的开展研究工作、技术创新和发明奠定坚实基础。 形态学科学研究的观察手段： 肉眼、放大镜、光学显微镜、电子显微镜等 结果以录象、摄像为据 样本制作类型： 活体培养、组织灌注染料、透明窗活体观察、涂片，铺片、压片，切片等 研究材料的制备类型 1 活体观察：精子，原虫，寄生虫，细菌，体细胞等 2 培养细胞：肿瘤细胞 各种体细胞等 3 涂片：血液、体液，羊水，灌洗液等 4 铺片：主要有疏松结缔组织铺片、胸、腹系膜铺片； 5 压片：肌组织，神经组织等 6 切片：各种器官、组织 光学显微镜简介 1 普通光学显微镜light microscope 应用广泛，放大倍数为数10倍至2,000倍。是实验室常配置的显微镜。 光镜的放大率等于物镜和目镜放大倍数的乘积。放大率受物镜分辨率的限制，分辨率是指能分辨物体两点间最短距离和能力。物镜的分辨率取决于它的镜口率（A），镜口率是指物镜从物全吸收的光量，它取决于物体点到镜面所成的角度和光线通过介质的折射率。 镜口率等于介质的折射率（η）与镜口角（μ）半数的正弦乘积（A=η× sin μ /2）。一般物镜光线通过的介质是空气，镜口率都小于1，而油浸镜的介质是香柏油，镜口率可达1.4。物镜的分辨率（δ）与光线的波长（λ）和物镜的镜口率（A）成一定比例（δ=λ/A）。已知可见光的波长平均为0.55μm，物镜最高镜口率为1.4，所以光镜最高分辨率约为0.4μm。 2 倒置显微镜inverted microscope 倒置显微镜是把光源和聚光器安装在显微镜的上方，物镜是放置在载物台的下方。倒置显微镜装配有各种附件，如普通物镜、相差、暗视野聚光器、紫外光源、各种滤片，以及摄像装置等，可进行多种实验观察。 这种显微镜的特点是增大了载物台放置标本的高度，载物台上可以放置培养皿，还可以安装保温罩和自动恒温调节器，直接观察体外培养的细胞，并可以对活细胞进行各种实验和连续观察和摄像。如装配有显微操作器，可进行细胞内注射、吸引细胞内液、细胞切割及细胞核移植等操作。 3 相差显微镜phase contrast microscope 用于研究体外培养的活细胞，可直接观察活细胞的形态结构及分裂增殖和运动等变化。相差显微镜的特点是改变光的相位，使相位差变为振幅差，借增强或减弱光的明暗度而观察生活标本的微细胞结构。 4 荧光显微镜flurorescent microscope 荧光显微镜的主要特点：观察目标之所以能够被看到，不是由于光源的照射，而是由于标本内的荧光物质吸收光源发出的激发光的光能，所呈现的荧光现象，如果停止光源照射，则荧光现象立即消失。 5 偏光显微镜polarization microscope 用于鉴定物质微细结构的光学性质，各向同性体isotropic substance（单折射体）或各向异性anisotropic substance（双折射体） 6 共焦激光扫描显微镜confocal laser scanning microscope,CLSM CLSM与普通光镜比较，在分辩率、反差、焦深等方面都有很大改进和发展，它可以更准确地检测、识别组织或细胞内的微细结构及其变化。 * *